עיבוד רגלי חרקים למיקרוסקופיה פלואורסצנטית: שיטה לשימור מבנים נוירומוסקולריים להדמיה

Abstract

מקור: גואן, W., ואח ‘. לדמיין דרוזופילה רגל מוטורי נוירון אקסונים דרך קוטיקל למבוגרים. ג’יי ויס אקספ. (2018).

סרטון זה מתאר שיטה לנתח, לתקן ולהרכיב את הרגל הבוגרת של דרוזופילה תוך שמירה על הנוירו-ממוסקולטורה שלה ללא פגע לצורך ניתוח הדמיה.

Protocol

פרוטוקול זה הוא קטע מתוך גואן ואח ‘.,לדמיין דרוזופילה רגל מוטורי נוירון אקסונים דרך קוטיקל למבוגרים, J. Vis. Exp. (2018). 1. ניתוח רגליים וקיבעון קח צלחת זכוכית רב באר ולמלא את המספר המתאים של בארות עם 70% אתנול. הוסיפו 15-20 CO2- זבובים מורדמים (מכל מין ובכל גיל) לכ?…

Representative Results

איור 1: הליך להרכבת רגליים על שקופיות מיקרוסקופ. לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

Materials

Ethanol absolute	Fisher	E/6550DF/17	Absolute analytical reagent grade
nonionic surfactant detergent	Sigma-Aldrich	T8787	Triton X-100, for molecular biology
Fine forceps	Sigma-Aldrich	F6521	Jewelers forceps, Dumont No. 5
Glass multi-well plate	Electron Microscopy Sciences	71563-01	9 cavity Pyrex, 100 mm x 85 mm
PFA	Thermofisher	28908	Pierc 16% Formaldehyde (w/v), Methanol-free
Glycerol	Fisher BioReagents	BP 229-1	Glycerol (Molecular Biology)
Spacers	Sun Jin Lab Co	IS006	iSpacer, four wells, around 12 μL working volume per well, 7 mm diameter, 0.18 mm deep
Square 22 mm x 22 mm coverslips	Fisher Scientific	FIS#12-541-B	No. 1.5-0.16 to 0.19 mm thick
Mounting Medium	Vector Laboratories	H-1000	Vectashield Antifade Mounting Medium