עיבוד רגלי חרקים למיקרוסקופיה פלואורסצנטית: שיטה לשימור מבנים נוירומוסקולריים להדמיה

Published: April 30, 2023

Abstract

מקור: גואן, W., ואח ‘. לדמיין דרוזופילה רגל מוטורי נוירון אקסונים דרך קוטיקל למבוגרים. ג’יי ויס אקספ. (2018).

סרטון זה מתאר שיטה לנתח, לתקן ולהרכיב את הרגל הבוגרת של דרוזופילה תוך שמירה על הנוירו-ממוסקולטורה שלה ללא פגע לצורך ניתוח הדמיה.

Protocol

פרוטוקול זה הוא קטע מתוך גואן ואח ‘.,לדמיין דרוזופילה רגל מוטורי נוירון אקסונים דרך קוטיקל למבוגרים, J. Vis. Exp. (2018). 1. ניתוח רגליים וקיבעון קח צלחת זכוכית רב באר ולמלא את המספר המתאים של בארות עם 70% אתנול. הוסיפו 15-20 CO2- זבובים מורדמים (מכל מין ובכל גיל) לכ?…

Representative Results

איור 1: הליך להרכבת רגליים על שקופיות מיקרוסקופ. לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

Materials

Ethanol absolute Fisher E/6550DF/17 Absolute analytical reagent grade
nonionic surfactant detergent Sigma-Aldrich T8787 Triton X-100, for molecular biology
Fine forceps Sigma-Aldrich F6521 Jewelers forceps, Dumont No. 5
Glass multi-well plate Electron Microscopy Sciences 71563-01 9 cavity Pyrex, 100 mm x 85 mm
PFA Thermofisher 28908 Pierc 16% Formaldehyde (w/v), Methanol-free
Glycerol Fisher BioReagents BP 229-1 Glycerol (Molecular Biology)
Spacers Sun Jin Lab Co IS006 iSpacer, four wells, around 12 μL working volume per well, 7 mm diameter, 0.18 mm deep
Square 22 mm x 22 mm coverslips Fisher Scientific FIS#12-541-B No. 1.5-0.16 to 0.19 mm thick
Mounting Medium Vector Laboratories H-1000 Vectashield Antifade Mounting Medium

Play Video

Cite This Article
Processing Insect Legs for Fluorescence Microscopy: A Method to Preserve Neuromuscular Structures for Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20121, doi: (2023).

View Video