Floresan Mikroskopi için Böcek Bacaklarının İşleniş: Görüntüleme için Nöromüsküler Yapıları Koruma Yöntemi

Abstract

Kaynak: Guan, W., vd. Yetişkin Kütikül yoluyla Drosophila Bacak Motor Nöron Aksonları Görselleştirin. J. Vis. Exp. (2018).

Bu videoda, Drosophila yetişkin bacağını görüntüleme analizi için nöromuskülatını sağlam tutarken parçalamak, düzeltmek ve monte etmek için bir yöntem açıklanmaktadır.

Protocol

Bu protokol Guan ve ark.,Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle, J. Vis. Exp. (2018)’den bir alıntıdır. 1. Bacak Diseksiyonu ve Fiksasyonu Bir cam çok kuyulu plaka alın ve uygun sayıda kuyuyu% 70 etanol ile doldurun. Her kuyuya 15-20 CO2-uyuşturulmış sinek (her iki cinsiyet ve herhangi bir yaşta) ekleyin ve bir fırça kullanarak, sinekler tamamen batırılana kadar sinekleri hafifçe etanol çözeltisine …

Representative Results

Şekil 1: Bacakları mikroskop slaytlarına monte etme prosedürü. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Materials

Ethanol absolute	Fisher	E/6550DF/17	Absolute analytical reagent grade
nonionic surfactant detergent	Sigma-Aldrich	T8787	Triton X-100, for molecular biology
Fine forceps	Sigma-Aldrich	F6521	Jewelers forceps, Dumont No. 5
Glass multi-well plate	Electron Microscopy Sciences	71563-01	9 cavity Pyrex, 100 mm x 85 mm
PFA	Thermofisher	28908	Pierc 16% Formaldehyde (w/v), Methanol-free
Glycerol	Fisher BioReagents	BP 229-1	Glycerol (Molecular Biology)
Spacers	Sun Jin Lab Co	IS006	iSpacer, four wells, around 12 μL working volume per well, 7 mm diameter, 0.18 mm deep
Square 22 mm x 22 mm coverslips	Fisher Scientific	FIS#12-541-B	No. 1.5-0.16 to 0.19 mm thick
Mounting Medium	Vector Laboratories	H-1000	Vectashield Antifade Mounting Medium