Elaborazione delle gambe degli insetti per microscopia a fluorescenza: un metodo per preservare le strutture neuromuscolari per l'imaging

Abstract

Fonte: Guan, W., et al. J. Vis. Exp. (2018).

Questo video descrive un metodo per sezionare, fissare e montare la gamba adulta Drosophila preservando la sua neuromuscolatura intatta per l’analisi dell’imaging.

Protocol

Questo protocollo è un estratto da Guan et al., Visualizza gli assoni dei motoneuroni delle gambe Drosophila attraverso la cuticola adulta, J. Vis. Exp. 1. Dissezione e fissazione delle gambe Prendi una piastra multi-pozzo di vetro e riempi il numero appropriato di pozzi con il 70% di etanolo. Aggiungere 15-20 mosche anestetizzate di CO2(di entrambi i sessi e di qualsiasi età) ad ogni pozzo e, usando un pennello, tamponare delicatamente le mosc…

Representative Results

Figura 1: Procedura per montare le gambe su vetrini al microscopio. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

Materials

Ethanol absolute	Fisher	E/6550DF/17	Absolute analytical reagent grade
nonionic surfactant detergent	Sigma-Aldrich	T8787	Triton X-100, for molecular biology
Fine forceps	Sigma-Aldrich	F6521	Jewelers forceps, Dumont No. 5
Glass multi-well plate	Electron Microscopy Sciences	71563-01	9 cavity Pyrex, 100 mm x 85 mm
PFA	Thermofisher	28908	Pierc 16% Formaldehyde (w/v), Methanol-free
Glycerol	Fisher BioReagents	BP 229-1	Glycerol (Molecular Biology)
Spacers	Sun Jin Lab Co	IS006	iSpacer, four wells, around 12 μL working volume per well, 7 mm diameter, 0.18 mm deep
Square 22 mm x 22 mm coverslips	Fisher Scientific	FIS#12-541-B	No. 1.5-0.16 to 0.19 mm thick
Mounting Medium	Vector Laboratories	H-1000	Vectashield Antifade Mounting Medium