Procesamiento de patas de insectos para microscopía de fluorescencia: un método para preservar estructuras neuromusculares para imágenes

Abstract

Fuente: Guan, W., et al. Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle. J. Vis. (2018).

Este video describe un método para diseccionar, arreglar y montar la pierna adulta De Drosophila mientras preserva su neuromusculatura intacta para el análisis de imágenes.

Protocol

Este protocolo es un extracto de Guan et al., Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle, J. Vis. Exp. (2018). 1. Disección y fijación de las piernas Tome una placa de vidrio multi-pozo y llene el número apropiado de pozos con 70% de etanol. Añadir 15-20 CO2moscas anestesiadas (de cualquier sexo y cualquier edad) a cada pozo y mediante el uso de un cepillo, suavemente dab las moscas en la solución de etanol hasta q…

Representative Results

Figura 1: Procedimiento para montar las piernas en diapositivas del microscopio. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Materials

Ethanol absolute	Fisher	E/6550DF/17	Absolute analytical reagent grade
nonionic surfactant detergent	Sigma-Aldrich	T8787	Triton X-100, for molecular biology
Fine forceps	Sigma-Aldrich	F6521	Jewelers forceps, Dumont No. 5
Glass multi-well plate	Electron Microscopy Sciences	71563-01	9 cavity Pyrex, 100 mm x 85 mm
PFA	Thermofisher	28908	Pierc 16% Formaldehyde (w/v), Methanol-free
Glycerol	Fisher BioReagents	BP 229-1	Glycerol (Molecular Biology)
Spacers	Sun Jin Lab Co	IS006	iSpacer, four wells, around 12 μL working volume per well, 7 mm diameter, 0.18 mm deep
Square 22 mm x 22 mm coverslips	Fisher Scientific	FIS#12-541-B	No. 1.5-0.16 to 0.19 mm thick
Mounting Medium	Vector Laboratories	H-1000	Vectashield Antifade Mounting Medium