Verwerking van insectenpoten voor fluorescentiemicroscopie: een methode om neuromusculaire structuren voor beeldvorming te behouden

Published: April 30, 2023

Abstract

Bron: Guan, W., et al. Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle. J.Vis. Exp. (2018).

Deze video beschrijft een methode om het drosophila volwassen been te ontleden, te repareren en te monteren, terwijl het neuromusculatuur intact blijft voor beeldvormingsanalyse.

Protocol

Dit protocol is een fragment uit Guan et al., Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle, J. Vis. Exp. (2018). 1. Beendissectie en fixatie Neem een glazen multi-well plaat en vul het juiste aantal putten met 70% ethanol. Voeg 15-20 CO2-verdoofde vliegen (van beide geslachten en elke leeftijd) toe aan elke put en dep met een borstel de vliegen voorzichtig in de ethanoloplossing totdat de vliegen volledig onder water staa…

Representative Results

Figuur 1: Procedure voor het monteren van poten op microscoopglaasjes. Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.

Materials

Ethanol absolute Fisher E/6550DF/17 Absolute analytical reagent grade
nonionic surfactant detergent Sigma-Aldrich T8787 Triton X-100, for molecular biology
Fine forceps Sigma-Aldrich F6521 Jewelers forceps, Dumont No. 5
Glass multi-well plate Electron Microscopy Sciences 71563-01 9 cavity Pyrex, 100 mm x 85 mm
PFA Thermofisher 28908 Pierc 16% Formaldehyde (w/v), Methanol-free
Glycerol Fisher BioReagents BP 229-1 Glycerol (Molecular Biology)
Spacers Sun Jin Lab Co IS006 iSpacer, four wells, around 12 μL working volume per well, 7 mm diameter, 0.18 mm deep
Square 22 mm x 22 mm coverslips Fisher Scientific FIS#12-541-B No. 1.5-0.16 to 0.19 mm thick
Mounting Medium Vector Laboratories H-1000 Vectashield Antifade Mounting Medium

Play Video

Cite This Article
Processing Insect Legs for Fluorescence Microscopy: A Method to Preserve Neuromuscular Structures for Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20121, doi: (2023).

View Video