Verarbeitung von Insektenbeinen für die Fluoreszenzmikroskopie: Eine Methode zur Erhaltung neuromuskulärer Strukturen für die Bildgebung

Published: April 30, 2023

Abstract

Quelle: Guan, W., et al. Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle. J. Vis. (2018).

Dieses Video beschreibt eine Methode, um das Drosophila Erwachsenenbein zu sezieren, zu fixieren und zu montieren, während seine Neuromuskulatur für die bildgebende Analyse intakt bleibt.

Protocol

Dieses Protokoll ist ein Auszug aus Guan et al., Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle, J. Vis. Exp. (2018). 1. Beinsektion und Fixierung Nehmen Sie eine Glas-Multi-Well-Platte und füllen Sie die entsprechende Anzahl von Brunnen mit 70% Ethanol. Fügen Sie 15–20 CO2-anästhetisierte Fliegen (entweder Geschlecht und jedes Alter) zu jedem Brunnen hinzu und mit einem Pinsel die Fliegen vorsichtig in die Ethanollösung zu tapp…

Representative Results

Abbildung 1: Verfahren zum Befestigen von Beinen auf Mikroskopschlitten. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.

Materials

Ethanol absolute Fisher E/6550DF/17 Absolute analytical reagent grade
nonionic surfactant detergent Sigma-Aldrich T8787 Triton X-100, for molecular biology
Fine forceps Sigma-Aldrich F6521 Jewelers forceps, Dumont No. 5
Glass multi-well plate Electron Microscopy Sciences 71563-01 9 cavity Pyrex, 100 mm x 85 mm
PFA Thermofisher 28908 Pierc 16% Formaldehyde (w/v), Methanol-free
Glycerol Fisher BioReagents BP 229-1 Glycerol (Molecular Biology)
Spacers Sun Jin Lab Co IS006 iSpacer, four wells, around 12 μL working volume per well, 7 mm diameter, 0.18 mm deep
Square 22 mm x 22 mm coverslips Fisher Scientific FIS#12-541-B No. 1.5-0.16 to 0.19 mm thick
Mounting Medium Vector Laboratories H-1000 Vectashield Antifade Mounting Medium

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Cite This Article
Processing Insect Legs for Fluorescence Microscopy: A Method to Preserve Neuromuscular Structures for Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20121, doi: (2023).

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