Verarbeitung von Insektenbeinen für die Fluoreszenzmikroskopie: Eine Methode zur Erhaltung neuromuskulärer Strukturen für die Bildgebung

Abstract

Quelle: Guan, W., et al. Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle. J. Vis. (2018).

Dieses Video beschreibt eine Methode, um das Drosophila Erwachsenenbein zu sezieren, zu fixieren und zu montieren, während seine Neuromuskulatur für die bildgebende Analyse intakt bleibt.

Protocol

Dieses Protokoll ist ein Auszug aus Guan et al., Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle, J. Vis. Exp. (2018). 1. Beinsektion und Fixierung Nehmen Sie eine Glas-Multi-Well-Platte und füllen Sie die entsprechende Anzahl von Brunnen mit 70% Ethanol. Fügen Sie 15–20 CO2-anästhetisierte Fliegen (entweder Geschlecht und jedes Alter) zu jedem Brunnen hinzu und mit einem Pinsel die Fliegen vorsichtig in die Ethanollösung zu tapp…

Representative Results

Abbildung 1: Verfahren zum Befestigen von Beinen auf Mikroskopschlitten. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.

Materials

Ethanol absolute	Fisher	E/6550DF/17	Absolute analytical reagent grade
nonionic surfactant detergent	Sigma-Aldrich	T8787	Triton X-100, for molecular biology
Fine forceps	Sigma-Aldrich	F6521	Jewelers forceps, Dumont No. 5
Glass multi-well plate	Electron Microscopy Sciences	71563-01	9 cavity Pyrex, 100 mm x 85 mm
PFA	Thermofisher	28908	Pierc 16% Formaldehyde (w/v), Methanol-free
Glycerol	Fisher BioReagents	BP 229-1	Glycerol (Molecular Biology)
Spacers	Sun Jin Lab Co	IS006	iSpacer, four wells, around 12 μL working volume per well, 7 mm diameter, 0.18 mm deep
Square 22 mm x 22 mm coverslips	Fisher Scientific	FIS#12-541-B	No. 1.5-0.16 to 0.19 mm thick
Mounting Medium	Vector Laboratories	H-1000	Vectashield Antifade Mounting Medium