Bearbetning av insektsben för fluorescensmikroskopi: En metod för att bevara neuromuskulära strukturer för avbildning

Abstract

Källa: Guan, W., et al. Visualisera Drosophila Leg Motor Neuron Axons Genom vuxen nagelband. J. Vis. Exp. (2018).

Denna video beskriver en metod för att dissekera, fixa och montera Drosophila vuxna benet samtidigt bevara dess neuromusculature intakt för bildframställning analys.

Protocol

Detta protokoll är ett utdrag från Guan et al., Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle, J. Vis. Exp. (2018). 1. Bendesektion och fixering Ta en glasplatta med flera brunnar och fyll lämpligt antal brunnar med 70% etanol. Tillsätt 15–20 CO2-sövda flugor (av båda könen och alla åldrar) till varje brunn och genom att använda en borste, doppa försiktigt flugorna i etanollösningen tills flugorna är helt ned…

Representative Results

Figur 1: Förfarande för montering av ben på mikroskoprutschbanor. Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.

Materials

Ethanol absolute	Fisher	E/6550DF/17	Absolute analytical reagent grade
nonionic surfactant detergent	Sigma-Aldrich	T8787	Triton X-100, for molecular biology
Fine forceps	Sigma-Aldrich	F6521	Jewelers forceps, Dumont No. 5
Glass multi-well plate	Electron Microscopy Sciences	71563-01	9 cavity Pyrex, 100 mm x 85 mm
PFA	Thermofisher	28908	Pierc 16% Formaldehyde (w/v), Methanol-free
Glycerol	Fisher BioReagents	BP 229-1	Glycerol (Molecular Biology)
Spacers	Sun Jin Lab Co	IS006	iSpacer, four wells, around 12 μL working volume per well, 7 mm diameter, 0.18 mm deep
Square 22 mm x 22 mm coverslips	Fisher Scientific	FIS#12-541-B	No. 1.5-0.16 to 0.19 mm thick
Mounting Medium	Vector Laboratories	H-1000	Vectashield Antifade Mounting Medium