Behandling av insektben for fluorescensmikroskopi: En metode for å bevare nevromuskulære strukturer for avbildning

Abstract

Kilde: Guan, W., et al. Visualiser Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle. J. Vis. Utt. (2018).

Denne videoen beskriver en metode for å dissekere, fikse og montere Drosophila voksenben mens du bevarer nevromuskulaturen intakt for bildeanalyse.

Protocol

Denne protokollen er et utdrag fra Guan et al.,Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle, J. Vis. Exp. (2018). 1. Benavhandling og fiksering Ta en multibrønnplate i glass og fyll passende antall brønner med 70% etanol. Tilsett 15-20 CO 2-bedøvede fluer (av enten kjønn og enhver alder) til hver brønn, og ved å bruke en børste, forsiktig dab fluene inn i etanoloppløsningen til fluene er helt nedsenket.<strong…

Representative Results

Figur 1: Prosedyre for å montere ben på mikroskopsklier. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.

Materials

Ethanol absolute	Fisher	E/6550DF/17	Absolute analytical reagent grade
nonionic surfactant detergent	Sigma-Aldrich	T8787	Triton X-100, for molecular biology
Fine forceps	Sigma-Aldrich	F6521	Jewelers forceps, Dumont No. 5
Glass multi-well plate	Electron Microscopy Sciences	71563-01	9 cavity Pyrex, 100 mm x 85 mm
PFA	Thermofisher	28908	Pierc 16% Formaldehyde (w/v), Methanol-free
Glycerol	Fisher BioReagents	BP 229-1	Glycerol (Molecular Biology)
Spacers	Sun Jin Lab Co	IS006	iSpacer, four wells, around 12 μL working volume per well, 7 mm diameter, 0.18 mm deep
Square 22 mm x 22 mm coverslips	Fisher Scientific	FIS#12-541-B	No. 1.5-0.16 to 0.19 mm thick
Mounting Medium	Vector Laboratories	H-1000	Vectashield Antifade Mounting Medium