الهضم الأنزيمي والتفكك اليدوي: طريقة لإعداد أجنة C. elegans لثقافة الخلايا
Published: April 30, 2023
Abstract
المصدر: سانجاليتي، ر. بيانكي، L. A طريقة لزراعة الخلايا الجنينية C. elegans. ج. فيس إكسب. (2013).
يقدم هذا الفيديو طريقة لعزل وزراعة الخلايا الجنينية C. elegans العقيمة في المختبر.
Protocol
1. تفكك الخلايا الجنينية إجراء الخطوات التالية من الإجراء في ظل ظروف معقمة باستخدام غطاء محرك السيارة تدفق صفح. في حين أن الحيوانات هي ثوب على لوحات البكتيريا، يغسل والعلاج مع محلول تحلل تحتوي على التبييض ينبغي القضاء على معظم إن لم يكن كل البكتيريا. وبالتالي استخدام غطاء صف?…
Representative Results
الشكل 1 – الأرقام 1- الأرقام التي يمكن أن ج. الأجنة elegans قبل وبعد العلاج chitinase. (أ) صورة للبيض قبل التعرض للتشيتيناز. يشير السهم إلى قشر البيض الشفاف وسليم المحيط بالجنين. (ب) البيض المعالج بتشيتين…
Materials
| REAGENTS | ||
| Leibovitz's L-15 Medium (1x) Liquid | Invitrogen | 11415-064 |
| Fetal Bovine Serum | Invitrogen | 16140-063 |
| Penicillin-streptomycin | Sigma | P4333-100ML |
| Chitinase from Streptomyces Griseus | Sigma | C6137-25UN |
| Peanut Lectin | Sigma | L0881-10MG |
| EQUIPMENT | ||
| 101-1000 μl Blue Graduated Pipet Tips | USA Scentific | 1111-2821 |
| 10 ml Sterilized Pipet Individually Wrapped | USA Scentific | 1071-0810 |
| Ergonomic Variable Volume (100-1000 μl) Pipettor with tip ejector | VWR International Inc. | 89079-974 |
| Portable Pipet Aid, Drummond | VWR International Inc. | 53498-103 |
| Transfer Plastic Pipet Sterile | VWR International Inc. | 14670-114 |
| 15 ml Conical Tube | USA Scentific | 1475-1611 |
| Sterile 18 gauge Needles | Becton, Dickinson and Co. | 305196 |
| Sterile 10 ml Syringes | Becton, Dickinson and Co. | 305482 |
| Plastic Syringe Filters Corning 0,20 μm pore size | Corning | 431224 |
| Acrodic 25 mm Syringe filter w/5 μm versapor Membrane | VWR International Inc. | 28144-095 |
| 60×15 mm Petri Dish Sterile | VWR International Inc. | 82050-548 |
| 100×15 mm Petri Dish Sterile | VWR International Inc. | 82050-912 |
| 12 mm Diameter Glass Coverslips | VWR International Inc. | 48300-560 |
| Clear Cell Culture Plates 24 Well Flat Bottom w/lid | Thomas scientific | 6902A09 |
| Dumont #5- Fine Forceps | Fine Science Tools | 11254-20 |
| Centrifuge 5702 | Eppendorf | 22629883 |
| Laminar Flow Hood | ||
| Inverted Microscope with x10 objective | ||
| Ambient air humidified Incubator |
Cite This Article
Enzymatic Digestion and Manual Dissociation: A Method to Prepare C. elegans Embryos for Cell Culture. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20159, doi: (2023).