Digestão Enzimática e Dissociação Manual: Um Método para Preparar embriões C. elegans para cultura celular
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Sangaletti, R. e Bianchi, L. A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells. J. Vis. Exp. (2013).
Este vídeo introduz um método para isolar e estéril cultura células C. elegans embrionárias in vitro.
Protocol
1. Dissociação de células embrionárias Conduzir os próximos passos do procedimento em condições estéreis usando uma capa de fluxo laminar. Enquanto os animais estão vestidos em placas de bactérias, as lavagens e o tratamento com a solução de lise contendo alvejante devem eliminar a maioria, se não todas as bactérias. Assim, o uso de um capô laminar neste ponto do procedimento evita uma nova contaminação da suspensão do ovo. Resuspend ovos pelleted em 1 ml de 2 mg/ml …
Representative Results
Figura 1. C. elegans embriões antes e depois do tratamento de chitinase. (A) Fotografia de ovos antes da exposição à chitinase. A seta aponta para a casca de ovo transparente e intacta em torno de um embrião. (B) Ovos tratados com chitinase por 10 min. As cascas de ovos foram digeridas e não são mais visíveis ao redor dos embriões. As…
Materials
| REAGENTS | ||
| Leibovitz's L-15 Medium (1x) Liquid | Invitrogen | 11415-064 |
| Fetal Bovine Serum | Invitrogen | 16140-063 |
| Penicillin-streptomycin | Sigma | P4333-100ML |
| Chitinase from Streptomyces Griseus | Sigma | C6137-25UN |
| Peanut Lectin | Sigma | L0881-10MG |
| EQUIPMENT | ||
| 101-1000 μl Blue Graduated Pipet Tips | USA Scentific | 1111-2821 |
| 10 ml Sterilized Pipet Individually Wrapped | USA Scentific | 1071-0810 |
| Ergonomic Variable Volume (100-1000 μl) Pipettor with tip ejector | VWR International Inc. | 89079-974 |
| Portable Pipet Aid, Drummond | VWR International Inc. | 53498-103 |
| Transfer Plastic Pipet Sterile | VWR International Inc. | 14670-114 |
| 15 ml Conical Tube | USA Scentific | 1475-1611 |
| Sterile 18 gauge Needles | Becton, Dickinson and Co. | 305196 |
| Sterile 10 ml Syringes | Becton, Dickinson and Co. | 305482 |
| Plastic Syringe Filters Corning 0,20 μm pore size | Corning | 431224 |
| Acrodic 25 mm Syringe filter w/5 μm versapor Membrane | VWR International Inc. | 28144-095 |
| 60×15 mm Petri Dish Sterile | VWR International Inc. | 82050-548 |
| 100×15 mm Petri Dish Sterile | VWR International Inc. | 82050-912 |
| 12 mm Diameter Glass Coverslips | VWR International Inc. | 48300-560 |
| Clear Cell Culture Plates 24 Well Flat Bottom w/lid | Thomas scientific | 6902A09 |
| Dumont #5- Fine Forceps | Fine Science Tools | 11254-20 |
| Centrifuge 5702 | Eppendorf | 22629883 |
| Laminar Flow Hood | ||
| Inverted Microscope with x10 objective | ||
| Ambient air humidified Incubator |
Cite This Article
Enzymatic Digestion and Manual Dissociation: A Method to Prepare C. elegans Embryos for Cell Culture. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20159, doi: (2023).