Digestão Enzimática e Dissociação Manual: Um Método para Preparar embriões C. elegans para cultura celular

Published: April 30, 2023

Abstract

Fonte: Sangaletti, R. e Bianchi, L. A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells. J. Vis. Exp. (2013). 

Este vídeo introduz um método para isolar e estéril cultura células C. elegans embrionárias in vitro.

Protocol

1. Dissociação de células embrionárias Conduzir os próximos passos do procedimento em condições estéreis usando uma capa de fluxo laminar. Enquanto os animais estão vestidos em placas de bactérias, as lavagens e o tratamento com a solução de lise contendo alvejante devem eliminar a maioria, se não todas as bactérias. Assim, o uso de um capô laminar neste ponto do procedimento evita uma nova contaminação da suspensão do ovo. Resuspend ovos pelleted em 1 ml de 2 mg/ml …

Representative Results

Figura 1. C. elegans embriões antes e depois do tratamento de chitinase. (A) Fotografia de ovos antes da exposição à chitinase. A seta aponta para a casca de ovo transparente e intacta em torno de um embrião. (B) Ovos tratados com chitinase por 10 min. As cascas de ovos foram digeridas e não são mais visíveis ao redor dos embriões. As…

Materials

REAGENTS
Leibovitz's L-15 Medium (1x) Liquid Invitrogen 11415-064
Fetal Bovine Serum Invitrogen 16140-063
Penicillin-streptomycin Sigma P4333-100ML
Chitinase from Streptomyces Griseus Sigma C6137-25UN
Peanut Lectin Sigma L0881-10MG
EQUIPMENT
101-1000 μl Blue Graduated Pipet Tips USA Scentific 1111-2821
10 ml Sterilized Pipet Individually Wrapped USA Scentific 1071-0810
Ergonomic Variable Volume (100-1000 μl) Pipettor with tip ejector VWR International Inc. 89079-974
Portable Pipet Aid, Drummond VWR International Inc. 53498-103
Transfer Plastic Pipet Sterile VWR International Inc. 14670-114
15 ml Conical Tube USA Scentific 1475-1611
Sterile 18 gauge Needles Becton, Dickinson and Co. 305196
Sterile 10 ml Syringes Becton, Dickinson and Co. 305482
Plastic Syringe Filters Corning 0,20 μm pore size Corning 431224
Acrodic 25 mm Syringe filter w/5 μm versapor Membrane VWR International Inc. 28144-095
60×15 mm Petri Dish Sterile VWR International Inc. 82050-548
100×15 mm Petri Dish Sterile VWR International Inc. 82050-912
12 mm Diameter Glass Coverslips VWR International Inc. 48300-560
Clear Cell Culture Plates 24 Well Flat Bottom w/lid Thomas scientific 6902A09
Dumont #5- Fine Forceps Fine Science Tools 11254-20
Centrifuge 5702 Eppendorf 22629883
Laminar Flow Hood
Inverted Microscope with x10 objective
Ambient air humidified Incubator

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Cite This Article
Enzymatic Digestion and Manual Dissociation: A Method to Prepare C. elegans Embryos for Cell Culture. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20159, doi: (2023).

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