Digestión enzimática y disociación manual: un método para preparar embriones C. elegans para el cultivo celular

Published: April 30, 2023

Abstract

Fuente: Sangaletti, R. y Bianchi, L. Un método para la cultectación de células embrionarias C. elegans. J. Vis. (2013). 

Este video introduce un método para aislar y cultivar estérilmente células embrionarias C. elegans in vitro.

Protocol

1. Disociación de células embrionarias Realice los siguientes pasos del procedimiento en condiciones estériles utilizando una campana de flujo laminar. Mientras que los animales están vestidos en placas de bacterias, los lavados y el tratamiento con la solución de lisis que contiene lejía deben eliminar la mayoría si no todas las bacterias. Por lo tanto, el uso de una capucha laminar en este punto del procedimiento evita una nueva contaminación de la suspensión del huevo. Res…

Representative Results

Figura 1. C. embriones elegans antes y después del tratamiento con quitosa. (A) Fotografía de óvulos antes de la exposición a la quitosa. La flecha apunta a la cáscara de huevo transparente e intacta que rodea un embrión. (B) Huevos tratados con quitosa durante 10 min. Las cáscaras de huevo han sido digeridas y ya no son visibles alrede…

Materials

REAGENTS
Leibovitz's L-15 Medium (1x) Liquid Invitrogen 11415-064
Fetal Bovine Serum Invitrogen 16140-063
Penicillin-streptomycin Sigma P4333-100ML
Chitinase from Streptomyces Griseus Sigma C6137-25UN
Peanut Lectin Sigma L0881-10MG
EQUIPMENT
101-1000 μl Blue Graduated Pipet Tips USA Scentific 1111-2821
10 ml Sterilized Pipet Individually Wrapped USA Scentific 1071-0810
Ergonomic Variable Volume (100-1000 μl) Pipettor with tip ejector VWR International Inc. 89079-974
Portable Pipet Aid, Drummond VWR International Inc. 53498-103
Transfer Plastic Pipet Sterile VWR International Inc. 14670-114
15 ml Conical Tube USA Scentific 1475-1611
Sterile 18 gauge Needles Becton, Dickinson and Co. 305196
Sterile 10 ml Syringes Becton, Dickinson and Co. 305482
Plastic Syringe Filters Corning 0,20 μm pore size Corning 431224
Acrodic 25 mm Syringe filter w/5 μm versapor Membrane VWR International Inc. 28144-095
60×15 mm Petri Dish Sterile VWR International Inc. 82050-548
100×15 mm Petri Dish Sterile VWR International Inc. 82050-912
12 mm Diameter Glass Coverslips VWR International Inc. 48300-560
Clear Cell Culture Plates 24 Well Flat Bottom w/lid Thomas scientific 6902A09
Dumont #5- Fine Forceps Fine Science Tools 11254-20
Centrifuge 5702 Eppendorf 22629883
Laminar Flow Hood
Inverted Microscope with x10 objective
Ambient air humidified Incubator

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Cite This Article
Enzymatic Digestion and Manual Dissociation: A Method to Prepare C. elegans Embryos for Cell Culture. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20159, doi: (2023).

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