효소 소화 및 수동 해리: 세포 배양을 위한 C. 예르간 배아를 준비하는 방법

Abstract

출처: 상갈레티, R. 및 비안치, L. 배아 C. 예르간 세포를 배양하는 방법. J. 비스 익스펙. (2013). 

이 비디오는 시험관 내에서 배아 C. 엘레간 세포를 분리하고 살균하는 방법을 소개합니다.

Protocol

1. 배아 세포 해리 라미나르 플로우 후드를 사용하여 멸균 조건하에서 절차의 다음 단계를 수행한다. 동물은 박테리아 접시에 가운 동안, 표백제가 포함 된 용액을 가진 세차및 치료는 모든 박테리아가 아니라면 대부분제거해야합니다. 따라서 절차의이 시점에서 라미나르 후드를 사용하여 계란 현탁액의 새로운 오염을 방지할 수 있습니다. 펠렛 달걀을 2 mg/ml 치티나아?…

Representative Results

그림 1. C. 치티나아제 치료 전후에 예족 배아. (A) 치티나아제에 노출되기 전에 계란의 사진. 화살표는 배아를 둘러싼 투명하고 그대로 달걀 껍질을 가리킵니다. (B) 10 분 동안 치티나아제로 처리 된 계란. 달걀 껍질은 소화되었으며 배아 주위에 더 이상 볼 수 없?…

Materials

REAGENTS
Leibovitz's L-15 Medium (1x) Liquid	Invitrogen	11415-064
Fetal Bovine Serum	Invitrogen	16140-063
Penicillin-streptomycin	Sigma	P4333-100ML
Chitinase from Streptomyces Griseus	Sigma	C6137-25UN
Peanut Lectin	Sigma	L0881-10MG
EQUIPMENT
101-1000 μl Blue Graduated Pipet Tips	USA Scentific	1111-2821
10 ml Sterilized Pipet Individually Wrapped	USA Scentific	1071-0810
Ergonomic Variable Volume (100-1000 μl) Pipettor with tip ejector	VWR International Inc.	89079-974
Portable Pipet Aid, Drummond	VWR International Inc.	53498-103
Transfer Plastic Pipet Sterile	VWR International Inc.	14670-114
15 ml Conical Tube	USA Scentific	1475-1611
Sterile 18 gauge Needles	Becton, Dickinson and Co.	305196
Sterile 10 ml Syringes	Becton, Dickinson and Co.	305482
Plastic Syringe Filters Corning 0,20 μm pore size	Corning	431224
Acrodic 25 mm Syringe filter w/5 μm versapor Membrane	VWR International Inc.	28144-095
60×15 mm Petri Dish Sterile	VWR International Inc.	82050-548
100×15 mm Petri Dish Sterile	VWR International Inc.	82050-912
12 mm Diameter Glass Coverslips	VWR International Inc.	48300-560
Clear Cell Culture Plates 24 Well Flat Bottom w/lid	Thomas scientific	6902A09
Dumont #5- Fine Forceps	Fine Science Tools	11254-20
Centrifuge 5702	Eppendorf	22629883
Laminar Flow Hood
Inverted Microscope with x10 objective
Ambient air humidified Incubator