酵素消化と手動解離:細胞培養のための C.エレガンス 胚を準備する方法

Abstract

出典:サンガレッティ、R.とビアンキ、L. 胚性C.エレガンス細胞を培養するための方法。 J. ヴィス・エクス(2013).

このビデオでは、インビトロで胚性C.エレガンス細胞を単離し、無菌培養する方法を紹介します。

Protocol

1. 胚細胞解離 層流フードを使用して滅菌条件下で手順の次のステップを行います。動物は細菌プレートにガウンを着ているが、漂白剤を含む溶解溶液による溶解と治療は、すべての細菌ではないにしても、最も排除すべきである。したがって、手順のこの時点で層状フードを使用すると、卵の懸濁液の新たな汚染を防ぐことができます。 ペレット化した卵を1mlの2…

Representative Results

図 1.C.エレガンス胚は、チチナーゼ治療の前後に起こる。(A)チチナーゼに曝される前の卵の写真。矢印は、胚を取り巻く透明で無傷の卵殻を指しています。(B)卵を10分間、チチナーゼで処理した。卵殻は消化され、胚の周りにはもはや見えません。矢印は卵殻?…

Materials

REAGENTS
Leibovitz's L-15 Medium (1x) Liquid	Invitrogen	11415-064
Fetal Bovine Serum	Invitrogen	16140-063
Penicillin-streptomycin	Sigma	P4333-100ML
Chitinase from Streptomyces Griseus	Sigma	C6137-25UN
Peanut Lectin	Sigma	L0881-10MG
EQUIPMENT
101-1000 μl Blue Graduated Pipet Tips	USA Scentific	1111-2821
10 ml Sterilized Pipet Individually Wrapped	USA Scentific	1071-0810
Ergonomic Variable Volume (100-1000 μl) Pipettor with tip ejector	VWR International Inc.	89079-974
Portable Pipet Aid, Drummond	VWR International Inc.	53498-103
Transfer Plastic Pipet Sterile	VWR International Inc.	14670-114
15 ml Conical Tube	USA Scentific	1475-1611
Sterile 18 gauge Needles	Becton, Dickinson and Co.	305196
Sterile 10 ml Syringes	Becton, Dickinson and Co.	305482
Plastic Syringe Filters Corning 0,20 μm pore size	Corning	431224
Acrodic 25 mm Syringe filter w/5 μm versapor Membrane	VWR International Inc.	28144-095
60×15 mm Petri Dish Sterile	VWR International Inc.	82050-548
100×15 mm Petri Dish Sterile	VWR International Inc.	82050-912
12 mm Diameter Glass Coverslips	VWR International Inc.	48300-560
Clear Cell Culture Plates 24 Well Flat Bottom w/lid	Thomas scientific	6902A09
Dumont #5- Fine Forceps	Fine Science Tools	11254-20
Centrifuge 5702	Eppendorf	22629883
Laminar Flow Hood
Inverted Microscope with x10 objective
Ambient air humidified Incubator