Enzymatische Verdauung und manuelle Dissoziation: Eine Methode zur Vorbereitung von C. elegans Embryonen auf die Zellkultur

Abstract

Quelle: Sangaletti, R. und Bianchi, L. A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells. J. Vis. (2013). 

Dieses Video stellt eine Methode vor, um embryonale C. elegans-Zellen in vitro zu isolieren und steril zu kulturisieren.

Protocol

1. Embryonale Zelldissoziation Führen Sie die nächsten Schritte des Verfahrens unter sterilen Bedingungen mit einer laminaren Durchflusshaube durch. Während Tiere auf Bakterienplatten gekleidet sind, sollten die Wässer und die Behandlung mit der Lyselösung, die Bleichmittel enthält, die meisten, wenn nicht alle Bakterien eliminieren. So verhindert die Verwendung einer laminaren Haube an dieser Stelle des Verfahrens eine erneute Kontamination der Eisuspension. Pelleteier in 1 ml …

Representative Results

Abbildung 1. C. elegans Embryonen vor und nach der Chitinase-Behandlung. (A) Foto von Eiern vor der Chitinase. Der Pfeil zeigt auf die transparente und intakte Eierschale, die einen Embryo umgibt. (B) Eier, die 10 min lang mit Chitinase behandelt wurden. Die Eierschalen sind verdaut und sind um die Embryonen herum nicht mehr sichtbar. Die Pfei…

Materials

REAGENTS
Leibovitz's L-15 Medium (1x) Liquid	Invitrogen	11415-064
Fetal Bovine Serum	Invitrogen	16140-063
Penicillin-streptomycin	Sigma	P4333-100ML
Chitinase from Streptomyces Griseus	Sigma	C6137-25UN
Peanut Lectin	Sigma	L0881-10MG
EQUIPMENT
101-1000 μl Blue Graduated Pipet Tips	USA Scentific	1111-2821
10 ml Sterilized Pipet Individually Wrapped	USA Scentific	1071-0810
Ergonomic Variable Volume (100-1000 μl) Pipettor with tip ejector	VWR International Inc.	89079-974
Portable Pipet Aid, Drummond	VWR International Inc.	53498-103
Transfer Plastic Pipet Sterile	VWR International Inc.	14670-114
15 ml Conical Tube	USA Scentific	1475-1611
Sterile 18 gauge Needles	Becton, Dickinson and Co.	305196
Sterile 10 ml Syringes	Becton, Dickinson and Co.	305482
Plastic Syringe Filters Corning 0,20 μm pore size	Corning	431224
Acrodic 25 mm Syringe filter w/5 μm versapor Membrane	VWR International Inc.	28144-095
60×15 mm Petri Dish Sterile	VWR International Inc.	82050-548
100×15 mm Petri Dish Sterile	VWR International Inc.	82050-912
12 mm Diameter Glass Coverslips	VWR International Inc.	48300-560
Clear Cell Culture Plates 24 Well Flat Bottom w/lid	Thomas scientific	6902A09
Dumont #5- Fine Forceps	Fine Science Tools	11254-20
Centrifuge 5702	Eppendorf	22629883
Laminar Flow Hood
Inverted Microscope with x10 objective
Ambient air humidified Incubator