Enzymatische Verdauung und manuelle Dissoziation: Eine Methode zur Vorbereitung von C. elegans Embryonen auf die Zellkultur

Published: April 30, 2023

Abstract

Quelle: Sangaletti, R. und Bianchi, L. A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells. J. Vis. (2013). 

Dieses Video stellt eine Methode vor, um embryonale C. elegans-Zellen in vitro zu isolieren und steril zu kulturisieren.

Protocol

1. Embryonale Zelldissoziation Führen Sie die nächsten Schritte des Verfahrens unter sterilen Bedingungen mit einer laminaren Durchflusshaube durch. Während Tiere auf Bakterienplatten gekleidet sind, sollten die Wässer und die Behandlung mit der Lyselösung, die Bleichmittel enthält, die meisten, wenn nicht alle Bakterien eliminieren. So verhindert die Verwendung einer laminaren Haube an dieser Stelle des Verfahrens eine erneute Kontamination der Eisuspension. Pelleteier in 1 ml …

Representative Results

Abbildung 1. C. elegans Embryonen vor und nach der Chitinase-Behandlung. (A) Foto von Eiern vor der Chitinase. Der Pfeil zeigt auf die transparente und intakte Eierschale, die einen Embryo umgibt. (B) Eier, die 10 min lang mit Chitinase behandelt wurden. Die Eierschalen sind verdaut und sind um die Embryonen herum nicht mehr sichtbar. Die Pfei…

Materials

REAGENTS
Leibovitz's L-15 Medium (1x) Liquid Invitrogen 11415-064
Fetal Bovine Serum Invitrogen 16140-063
Penicillin-streptomycin Sigma P4333-100ML
Chitinase from Streptomyces Griseus Sigma C6137-25UN
Peanut Lectin Sigma L0881-10MG
EQUIPMENT
101-1000 μl Blue Graduated Pipet Tips USA Scentific 1111-2821
10 ml Sterilized Pipet Individually Wrapped USA Scentific 1071-0810
Ergonomic Variable Volume (100-1000 μl) Pipettor with tip ejector VWR International Inc. 89079-974
Portable Pipet Aid, Drummond VWR International Inc. 53498-103
Transfer Plastic Pipet Sterile VWR International Inc. 14670-114
15 ml Conical Tube USA Scentific 1475-1611
Sterile 18 gauge Needles Becton, Dickinson and Co. 305196
Sterile 10 ml Syringes Becton, Dickinson and Co. 305482
Plastic Syringe Filters Corning 0,20 μm pore size Corning 431224
Acrodic 25 mm Syringe filter w/5 μm versapor Membrane VWR International Inc. 28144-095
60×15 mm Petri Dish Sterile VWR International Inc. 82050-548
100×15 mm Petri Dish Sterile VWR International Inc. 82050-912
12 mm Diameter Glass Coverslips VWR International Inc. 48300-560
Clear Cell Culture Plates 24 Well Flat Bottom w/lid Thomas scientific 6902A09
Dumont #5- Fine Forceps Fine Science Tools 11254-20
Centrifuge 5702 Eppendorf 22629883
Laminar Flow Hood
Inverted Microscope with x10 objective
Ambient air humidified Incubator

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Cite This Article
Enzymatic Digestion and Manual Dissociation: A Method to Prepare C. elegans Embryos for Cell Culture. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20159, doi: (2023).

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