Enzymatisk fordøyelse og manuell dissosiasjon: En metode for å forberede C. elegans embryoer for cellekultur
Published: April 30, 2023
Abstract
Kilde: Sangaletti, R. og Bianchi, L. A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells. J. Vis. Utt. (2013).
Denne videoen introduserer en metode for å isolere og sterilt kultur embryonal C. elegans celler in vitro.
Protocol
1. Desosiasjon av embryonale celler Utfør de neste trinnene i prosedyren under sterile forhold ved hjelp av en laminær strømningshette. Mens dyr er kjole på bakterieplater, bør vaskene og behandlingen med lysisløsningen som inneholder blekemiddel eliminere de fleste om ikke alle bakteriene. Dermed ved hjelp av en laminær hette på dette punktet av prosedyren forhindrer ny forurensning av eggfjæringen. Resuspend pelleted egg i 1 ml 2 mg/ ml chitinase (lager i eggbuffer pH 6,5) …
Representative Results
Figur 1. C. elegans embryoer før og etter chitinase behandling. (A) Fotografi av egg før eksponering for chitinase. Pilen peker på det gjennomsiktige og intakte eggeskallet som omgir et embryo. (B) Egg behandlet med chitinase i 10 min. Eggeskallene har blitt fordøyd og er ikke lenger synlige rundt embryoene. Pilene peker på tre ganger emb…
Materials
| REAGENTS | ||
| Leibovitz's L-15 Medium (1x) Liquid | Invitrogen | 11415-064 |
| Fetal Bovine Serum | Invitrogen | 16140-063 |
| Penicillin-streptomycin | Sigma | P4333-100ML |
| Chitinase from Streptomyces Griseus | Sigma | C6137-25UN |
| Peanut Lectin | Sigma | L0881-10MG |
| EQUIPMENT | ||
| 101-1000 μl Blue Graduated Pipet Tips | USA Scentific | 1111-2821 |
| 10 ml Sterilized Pipet Individually Wrapped | USA Scentific | 1071-0810 |
| Ergonomic Variable Volume (100-1000 μl) Pipettor with tip ejector | VWR International Inc. | 89079-974 |
| Portable Pipet Aid, Drummond | VWR International Inc. | 53498-103 |
| Transfer Plastic Pipet Sterile | VWR International Inc. | 14670-114 |
| 15 ml Conical Tube | USA Scentific | 1475-1611 |
| Sterile 18 gauge Needles | Becton, Dickinson and Co. | 305196 |
| Sterile 10 ml Syringes | Becton, Dickinson and Co. | 305482 |
| Plastic Syringe Filters Corning 0,20 μm pore size | Corning | 431224 |
| Acrodic 25 mm Syringe filter w/5 μm versapor Membrane | VWR International Inc. | 28144-095 |
| 60×15 mm Petri Dish Sterile | VWR International Inc. | 82050-548 |
| 100×15 mm Petri Dish Sterile | VWR International Inc. | 82050-912 |
| 12 mm Diameter Glass Coverslips | VWR International Inc. | 48300-560 |
| Clear Cell Culture Plates 24 Well Flat Bottom w/lid | Thomas scientific | 6902A09 |
| Dumont #5- Fine Forceps | Fine Science Tools | 11254-20 |
| Centrifuge 5702 | Eppendorf | 22629883 |
| Laminar Flow Hood | ||
| Inverted Microscope with x10 objective | ||
| Ambient air humidified Incubator |
Cite This Article
Enzymatic Digestion and Manual Dissociation: A Method to Prepare C. elegans Embryos for Cell Culture. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20159, doi: (2023).