Enzymatisk matsmältning och manuell dissociation: En metod för att förbereda C. elegans embryon för cellkultur
Published: April 30, 2023
Abstract
Källa: Sangaletti, R. och Bianchi, L. A Metod för odling av embryonala C. elegansceller. J. Vis. Exp. (2013).
Denna video introducerar en metod för att isolera och sterilt odla embryonala C. elegans celler in vitro.
Protocol
1. Dissociation av embryonala celler Utför nästa steg i proceduren under sterila förhållanden med hjälp av en laminär flödeshuv. Medan djur är klänningar på bakterieplattor, bör tvättarna och behandlingen med lyslösningen som innehåller blekmedel eliminera de flesta om inte alla bakterier. Således med hjälp av en laminar huva vid denna tidpunkt av förfarandet förhindrar ny förorening av äggsuspensionen. Återanvänd pelleterade ägg i 1 ml 2 mg/ml chitinas (bestån…
Representative Results
Figur 1. C. elegans embryon före och efter chitinas behandling. a) Fotografi av ägg före exponering för chitinas. Pilen pekar på det genomskinliga och intakta äggskalet som omger ett embryo. B) Ägg behandlade med chitinas i 10 minuter. Äggskalen har smälts och syns inte längre runt embryona. Pilarna pekar på trefaldiga embryon som f…
Materials
| REAGENTS | ||
| Leibovitz's L-15 Medium (1x) Liquid | Invitrogen | 11415-064 |
| Fetal Bovine Serum | Invitrogen | 16140-063 |
| Penicillin-streptomycin | Sigma | P4333-100ML |
| Chitinase from Streptomyces Griseus | Sigma | C6137-25UN |
| Peanut Lectin | Sigma | L0881-10MG |
| EQUIPMENT | ||
| 101-1000 μl Blue Graduated Pipet Tips | USA Scentific | 1111-2821 |
| 10 ml Sterilized Pipet Individually Wrapped | USA Scentific | 1071-0810 |
| Ergonomic Variable Volume (100-1000 μl) Pipettor with tip ejector | VWR International Inc. | 89079-974 |
| Portable Pipet Aid, Drummond | VWR International Inc. | 53498-103 |
| Transfer Plastic Pipet Sterile | VWR International Inc. | 14670-114 |
| 15 ml Conical Tube | USA Scentific | 1475-1611 |
| Sterile 18 gauge Needles | Becton, Dickinson and Co. | 305196 |
| Sterile 10 ml Syringes | Becton, Dickinson and Co. | 305482 |
| Plastic Syringe Filters Corning 0,20 μm pore size | Corning | 431224 |
| Acrodic 25 mm Syringe filter w/5 μm versapor Membrane | VWR International Inc. | 28144-095 |
| 60×15 mm Petri Dish Sterile | VWR International Inc. | 82050-548 |
| 100×15 mm Petri Dish Sterile | VWR International Inc. | 82050-912 |
| 12 mm Diameter Glass Coverslips | VWR International Inc. | 48300-560 |
| Clear Cell Culture Plates 24 Well Flat Bottom w/lid | Thomas scientific | 6902A09 |
| Dumont #5- Fine Forceps | Fine Science Tools | 11254-20 |
| Centrifuge 5702 | Eppendorf | 22629883 |
| Laminar Flow Hood | ||
| Inverted Microscope with x10 objective | ||
| Ambient air humidified Incubator |
Cite This Article
Enzymatic Digestion and Manual Dissociation: A Method to Prepare C. elegans Embryos for Cell Culture. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20159, doi: (2023).