電気スタキシスアッセイ:C.エレガンスにおける運動を観察する方法

Overview

研究者は、ワームが感知し、応答する電界を適用することによって 、C.エレガンス のオンデマンドの動きを引き起こすことができます。 このビデオでは、エレクトロタクティクスの動作を紹介し、マイクロ流体デバイスで行われるプロトコルのサンプルを示します。

Protocol

このプロトコルは、カエノハブディティス・エレガンスのオンデマンド定量分析のためのマイクロ流体電気タクシー 、J.Vis.Expからの抜粋である。(2013). 

1. 電気スタキシス実験

1. マイクロチャネルを、モニターに接続されたカメラを搭載した顕微鏡のステージ(好ましくはXY可動)に置く(図1)。
2. 電源またはアンプの出力ワイヤをマイクロチャネルの電極に接続します。DC信号のみが必要な場合は、DC電源を簡単にするだけで十分ですが、機能発生器に接続されたアンプは、パルスDCおよびAC信号の適用も可能です。
3. マイクロチャンネルの出力チューブを使い捨てシリンジに取り付けます。M9生理学的バッファーに入口チューブの口を沈め、注射器の内部に負圧を加えることによってチャネルに液体を穏やかに引き上げます(手動またはシリンジポンプを使用)。入口と出口管の両方がM9で満たされている場合は、チューブから注射器を取り外します。両方のチューブを同じ高さにレベル設定して、静水圧駆動の流れを防ぎます。
4. DC電圧をチャンネルに適用し、抵抗(R= V/I)が0.6 MΩ程度(長さ50mm、幅0.3mm、深さ約0.1mmのマイクロチャンネル)であることを確認します。
5. チャネルの完全性に満足している場合は、上記の手順に従って、希釈された懸濁液からワームをチャネルにロードします。
6. シリンジを外し、チューブの相対高さを調整して流体操作を行います。この方法を使用して、チャネルの中央にワームを配置し、両方のチューブを同じ標高に平らに配置します。
7. L3ステージ動物の場合は4-12 V/cm、L4用は4~10 V/cm、ヤングアダルトの場合は2~4V/cmの適切な電圧に電源を設定します。電気信号をアクティブにし、ワームがフィールドに順応するための1分の事前暴露を可能にします。ワームはカソードに向かって動き始めるはずです。分が経過したら、カメラを使用して録画を開始します。
8. ACおよびパルスDC実験では、最大応答電界を上記から採用することができ、信号の周波数とデューティサイクルを必要に応じて変調することができます。
9. 実験が終了したら、チャネルからすべての液体(およびワーム)を取り出し、dH₂0でリンスし、125°Cのホットプレートにデバイスを残して乾燥させます。
10. NIH ImageJ(http://rsbweb.nih.gov/ij/)またはカスタムMATLABベースのワーム追跡ソフトウェアを使用して、記録されたビデオから手動でロコモディデータを抽出します。

Representative Results

図 1.線虫電気スタキシスアッセイ用マイクロ流体スクリーニングプラットフォームの概略図