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Encyclopedia of Experiments

전기 탁사 분석 : C. 예인선에서 운동을 관찰하는 방법

Overview

연구원은 벌레가 감지하고 반응하는 전기장을 적용하여 C. elegans에서 주문형 움직임을 유발할 수 있습니다.  이 비디오는 전기 전술 동작을 소개하고 미세 유체 장치에서 수행되는 샘플 프로토콜을 보여줍니다.

Protocol

이 프로토콜은 Caenorhabditis elegans'Locomotion, J. Vis. Exp의 온디맨드 정량 분석을 위한 Microfluidic 기반 전기 택시의 통 외,미세 유체 기반 전기 택시에서 발췌한 것입니다. (2013). 

1. 전기 택시 실험

  1. 모니터에 연결된 탑재 된 카메라와 현미경의 무대 (바람직하게는 XY-movable)에 마이크로 채널을 배치(도 1).
  2. 전원 공급 장치 또는 증폭기의 출력 와이어를 마이크로채널의 전극에 연결합니다. DC 신호만 원하는 경우 간단한 DC 전원 공급 장치가 충분하지만 함수 발생기에 연결된 앰프를 통해 펄스 DC 및 AC 신호를 적용할 수 있습니다.
  3. 마이크로 채널의 출력 튜브를 일회용 주사기에 부착합니다. M9 생리적 완충제에서 입구 튜브의 입을 침수하고 주사기 내부에 부정적인 압력을 가하여 부드럽게 액체를 채널로 갈망합니다 (수동으로 또는 주사기 펌프를 사용). 입구와 콘센트 튜브가 모두 M9로 채워지면 튜브에서 주사기를 분리합니다. 두 튜브를 동일한 높이로 레벨화하여 유수압 구동 흐름을 방지합니다.
  4. 채널에 DC 전압을 적용하고 저항(R= V/I)이 약 0.6MΩ(길이 50mm, 너비 0.3mm 및 ~0.1mm 깊이 마이크로채널)인지 확인합니다.
  5. 채널의 무결성에 만족하는 경우 위의 단계를 따라 희석된 서스펜션에서 채널로 웜을 로드합니다.
  6. 주사기를 분리하고 튜브의 상대 높이를 조정하여 흐름을 수압적으로 조작합니다. 이 방법을 사용하여 웜을 채널 중앙에 배치한 다음 두 튜브를 동일한 고도에 평평하게 놓습니다.
  7. L3 단계 동물의 경우 4-12 V/cm, L4의 경우 4-10 V/cm, 청년성인 경우 2-4 V/cm의 전력 공급 장치를 적절한 전압으로 설정합니다. 전기 신호를 활성화하고 웜이 필드에 적응할 수 있도록 1분 전에 노출되도록 합니다. 벌레는 음극을 향해 이동하기 시작해야합니다. 분이 지나면 카메라를 사용하여 녹화를 시작합니다.
  8. AC 및 펄스 DC 실험의 경우, 최대 반응전기장을 위에서 채택할 수 있으며 신호의 주파수 및 듀티 사이클은 원하는 대로 변조될 수 있다.
  9. 실험이 완료되면 채널에서 모든 액체(및 웜)를 제거하고 dH20으로 헹구고 장치를 125°C의 핫 플레이트에 두고 건조시.
  10. NIHImageJ(http://rsbweb.nih.gov/ij/)또는 맞춤형 MATLAB 기반 웜 트래킹 소프트웨어를 사용하여 녹화된 비디오에서 운동적 데이터를 수동으로 추출합니다.

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Representative Results

Figure 1
그림 1. 선충 전광국 분석법을 위한 미세유체 선별 플랫폼의 회로도. 

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