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Encyclopedia of Experiments

表皮激光损伤:诱导局部损伤以检查C. elegans 的修复过程

Overview

该视频介绍了激光伤害的方法,用于在蠕虫表皮中造成非常精确的伤害。 样本协议来自伤口反应和修复的研究。

Protocol

本协议摘自徐和奇斯霍尔姆,皮肤伤害的方法和检测伤口反应在C.elegans,J.Vis.Exp。 (2014).

1. 激光伤害

注: 使用第二次激光照射(800 nm)进行更精确的伤害。

  1. 在玻璃滑梯上准备阿加垫,融化的 2% agar。确保垫子类似于用于C.elegans实时成像的阿加垫。
  2. 将 10 只年轻的成人蠕虫转移到带蠕虫采摘的 agarose 垫上,并添加 2 μl 下降的 12 mM Levamisole 溶液。用盖子遮盖动物和液体。等待1-2分钟蠕虫瘫痪。
  3. 将玻璃滑梯放在旋转的磁盘聚焦显微镜上。移动舞台以找到蠕虫,并专注于具有 100X 目标(NA 1.4-1.46)的横向前部或后同步表皮。
  4. 将母体激光器的功率设置为 140 mW(在目标之前测量)。以 80 MHz 的重复率使用股骨激光。
    注: 每个200毫秒(相隔20毫秒)的两个脉冲足以伤到我们的手。
  5. 聚焦表皮细胞的表面并缠绕表皮。观察使用的任何荧光标记的细胞质(冒泡)的局部中断或局部漂白。
    注: 使用第二次激光时,请遵循适当的激光安全程序。使用女性到秒激光(如两个光子显微镜中的激光)进行线或点扫描应为激光伤害提供足够的功率。
    注: 虽然我们没有直接使用其他激光器的经验,但原则上应该可以使用传统的紫外线激光器(如C. elegans细胞消融中所用)。可选地,在旋转盘共焦上使用光漂白后荧光恢复 (FRAP) 模块来伤害表皮 (N. Pujol, 个人沟通)。

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表皮激光损伤:诱导局部损伤以检查<em>C. elegans 的</em>修复过程
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资料来源:徐,S.和奇斯霍尔姆,A.D. 皮肤伤害方法和C.elegans伤口反应分析。 J. 维斯(2014).

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