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Encyclopedia of Experiments

एपिडर्मल लेजर घायल: सी एलिगेंस में मरम्मत प्रक्रियाओं की जांच करने के लिए स्थानीयकृत क्षति को प्रेरित करना

Overview

यह वीडियो लेजर घायल होने की एक विधि का परिचय देता है, जिसका उपयोग कीड़ा एपिडर्मिस में बहुत सटीक चोटों का कारण बनता है।  नमूना प्रोटोकॉल घाव प्रतिक्रिया और मरम्मत के अध्ययन से है।

Protocol

यह प्रोटोकॉल Xu और Chisholm से एक अंश है, त्वचा घायल करने के लिए तरीके और सी Elegans,जे विस Exp में घाव प्रतिक्रियाओं के लिए परख । (2014).

1. लेजर घायल

नोट: अधिक सटीक घायल करने के लिए फेमटोसेकंड लेजर विकिरण (800 एनएम) का उपयोग करें।

  1. पिघला 2% आगर के साथ एक गिलास स्लाइड पर एगर पैड तैयार करें। सुनिश्चित करें कि पैड सी एलिगेंसकी लाइव इमेजिंग के लिए उपयोग किए जाने वाले एगर पैड के समान हैं।
  2. 10 युवा वयस्क कीड़े को कीड़े लेने के साथ एगर उठे पैड पर स्थानांतरित करें, और 12 एमएल लेविसोल समाधान की 2 माइक्रोल ड्रॉप जोड़ें। जानवरों और तरल को कवर स्लिप से ढक दें। कीड़े को लकवा मारने के लिए 1-2 मिनट रुको।
  3. ग्लास स्लाइड को कताई डिस्क कॉन्फोकल माइक्रोस्कोप पर रखें। कीड़े को खोजने के लिए मंच को स्थानांतरित करें और 100X उद्देश्य (एनए 1.4-1.46) के साथ पार्श्व पूर्वकाल या पीछे के सिंक्यटियल एपिडर्मिस पर ध्यान केंद्रित करें।
  4. 140 मिलियन प्रति वर्ष (उद्देश्य से पहले मापा गया) के लिए फेम्टोसेकंड लेजर की शक्ति निर्धारित करें। 80 मेगाहर्ट्ज की पुनरावृत्ति दर पर फेमटोसेकंड लेजर का उपयोग करें।
    नोट: 200 मेससेक की दो दालें (20 मेससेक द्वारा अलग) हमारे हाथों में घायल होने के लिए पर्याप्त हैं।
  5. एपिडर्मल सेल की एपिकल सतह पर ध्यान केंद्रित करें और एपिडर्मिस को घायल करें। साइटोप्लाज्म (बुदबुदाती) के स्थानीय व्यवधान या उपयोग किए जाने वाले किसी भी फ्लोरोसेंट मार्कर की स्थानीय ब्लीचिंग का निरीक्षण करें।
    नोट: फेम्टोसेकंड लेजर का उपयोग करते समय उचित लेजर सुरक्षा प्रक्रियाओं का पालन करें। लाइन या प्वाइंट स्कैन ऐसे दो फोटॉन माइक्रोस्कोप में उन लोगों के रूप में femtosecond लेजर का उपयोग कर लेजर घायल करने के लिए पर्याप्त शक्ति प्रदान करना चाहिए ।
    नोट: जबकि हमारे पास अन्य लेजर का उपयोग करने का प्रत्यक्ष अनुभव नहीं है, सिद्धांत रूप में घायल पारंपरिक यूवी लेजर (जैसा कि सी एलिगेंस सेल एब्लेशन में उपयोग किया जाता है) का उपयोग करना संभव होना चाहिए। वैकल्पिक रूप से, एपिडर्मिस (एन पुजोल, व्यक्तिगत संचार) को घायल करने के लिए स्पिनिंग डिस्क कॉन्फोकल पर फोटोब्लैचिंग (एफआरएपी) मॉड्यूल के बाद फ्लोरेसेंस रिकवरी का उपयोग करें।

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एपिडर्मल लेजर घायल: <em>सी एलिगेंस</em> में मरम्मत प्रक्रियाओं की जांच करने के लिए स्थानीयकृत क्षति को प्रेरित करना
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स्रोत: Xu, एस और Chisholm, त्वचा घायल करने के लिए ए डी विधियां और सी एलिगेंसमें घाव प्रतिक्रियाओं के लिए परख । जे विस एक्सप्रेस। (2014). 

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