JoVE Journal > Chemistry
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Results
Discussion
Disclosures
Acknowledgements
Materials
References
Automatic Translation
Chemistry

En praktisk metode for utvinning og analyse med høyt trykk væske kromatografi katekolaminer nevrotransmittere og deres metabolitter

Published: March 01, 2018
doi:
10.3791/56445
, , , ,
1School of Public Health of Southeast University,Laboratory of Environment and Biosafety Research Institute of Southeast University in Suzhou, 2Key Laboratory of Child Development and Learning Science (Ministry of Education), School of Biological Science & Medical Engineering,Southeast University, 3School of Public Health,Tianjin Medical University, 4British Columbia Academy,Nanjing Foreign Language School

Summary

Vi presenterer en praktisk solid-fase utvinning koblet til høytrykks flytende kromatografi (HPLC) med elektrokjemiske deteksjon (ECD) samtidige fastsettelse av tre monoamin nevrotransmittere, og to av deres metabolitter i spedbarn urin. Vi har også identifisere metabolitten MHPG som en potensiell biomarkør for tidlig diagnostikk av hjerneskade for spedbarn.

Abstract

Utvinning og analyse av katekolaminer nevrotransmittere i biologiske væsker er av stor betydning i vurderingen nervesystemet funksjon og sykdommer, men deres presise målingen er fortsatt en utfordring. Mange protokoller har blitt beskrevet for nevrotransmitter måling av en rekke instrumenter, inkludert høytrykks flytende kromatografi (HPLC). Men det er mangler, for eksempel komplisert operasjon eller vanskelige å oppdage flere mål, som ikke kan unngås, og for tiden dominerende analyse teknikken er fortsatt HPLC kombinert med sensitive elektrokjemiske eller fluorimetric deteksjon, grunn dens høy følsomhet og god selektivitet. Her er en detaljert protokoll beskrevet for forbehandling og påvisning av katekolaminer med høyt trykk væske kromatografi med elektrokjemiske deteksjon (såkalt HPLC-ECD) i ekte urinprøver av spedbarn, benytter electrospun sammensatte nanofibers sammensatt polymere crown Ether med polystyren som adsorbent, også kjent som metoden pakket-fiber solid fase utvinning (PFSPE). Vi viser hvordan urin prøver kan lett precleaned av en nanofiber-pakket solid fase-kolonne, og hvordan kan analytter i utvalget være raskt beriket, desorbed og oppdaget på et ECD system. PFSPE forenkler forbehandling prosedyrer for biologiske prøver, slik at redusert tid og bekostning reduksjon av tapet av mål.

Alt illustrerer dette arbeidet en enkel og praktisk protokoll for solid-fase utvinning koblet til en såkalt HPLC-ECD system for samtidige fastsettelse av tre monoamin nevrotransmittere (noradrenalin (NE), adrenalin (E), dopamin (DA)) og to av deres metabolitter (3-metoksy-4-hydroxyphenylglycol (MHPG) og 3,4-dihydroxy-phenylacetic syre (DOPAC)) i spedbarn urin. Etablerte protokollen ble brukt for å vurdere forskjellene i urin katekolaminer og deres metabolitter mellom høy risiko spedbarn med perinatal hjerneskade og sunn kontroller. Komparativ analyse avslørte en betydelig forskjell i urin MHPG mellom de to gruppene, indikerer at katekolaminer metabolitter kan være en viktig kandidat markør for tidlig diagnostisering av tilfeller utsatt for hjerneskade hos spedbarn.

Introduction

Katekolaminer nevrotransmittere og metabolitten innholdet i kroppsvæsker kan påvirke nevrale funksjon og påvirker balansen av svar til stimulans til en stor grad1. Abnormities kan føre til en rekke sykdommer, for eksempel pheochromacytoma, ganglioneuroma, neuroblastom og nevrologiske lidelser1,2. Utvinning og fastsettelse av katekolaminer i kroppsvæsker er meningsfulle for diagnostisering av relevante sykdommer. Men katekolaminer i biologiske prøver finnes i lave konsentrasjoner, og er lett oksidert. Videre, de er svært vanskelig å elute på grunn av den store mengden av interferens i middels3. Dermed er samtidige påvisning av katekolaminer i biologiske væsker fortsatt en utfordring.

Det har vært vurderinger viser at urin katekolaminer kan være et mål av stress, og at nivåene er viktig biologiske markører svarer taktil stimulering behandling i nyfødte5. Ifølge forskning, alle barn som har lidd av tidlig hendelser er utsatt for hjernen skade4,5,6, og skade kan føre til unormal utgivelsen av katekolaminer og relaterte saker i væsker. Det finnes avanserte magnetisk resonans teknikker som kan oppdage hjerneskade i tidligere faser7,8. Men innen de første 48 timer, vil en unormal neurodevelopmental prosessen føre til permanent hjerneskade som ikke er tydelig i medisinske bilder11. Dessuten, høy kostnad og knappe ressurser, sammen med andre faktorer, gjør det umulig for alle neonatal enheter skal ha tilgang til disse spesialiserte neuro-imaging teknikker. Men bruk av en lett tilgjengelig og praktisk biomarkør (som katekolaminer og deres metabolitter) kunne overvinne disse svakhetene, og screening av en biomarkør i menneskelig væsker kan hjelpe i tidlig diagnostikk av hjerneskade og føre til be Identifikasjon av nyfødte spedbarn trenger neuroprotection9. Katekolaminer i urinen kan en enkelt og opplagt indeks, på grunn av den direkte korrelasjonen mellom mengden av dem ut i væsker og neuroactivity funksjon.

Blant biologiske væsker, cerebrospinalvæske (CSF) og plasmaprøver er ikke lett å få via eksisterende traumatisk prosedyrer, og det er også svært vanskelig å bli kvitt interferensen selvklebende protein og andre urenheter, fører til en plagsom og tidkrevende utvalg prosess som er uegnet for gjentatte gjenkjenning. Også for barn er det nesten umulig å få eksemplene på en traumatisk måte. Derfor urin prøvetaking er bedre enn den andre former for prøvetaking, som det er ikke-invasiv, enkel å betjene, og kan gjøres gjentatte ganger. Urinprøver er rikelig og lett å lagre og vise store fordeler over andre former for biologiske prøver.

De viktigste metodene for å kvantifisere katekolaminer i biologiske væsker inkluderer radioenzymic analyser10, enzym knyttet immun-absorberende analyser11, voltammetry12 og termisk linsen massespektrometri13. Men mangler finnes, som omveier og vanskelig å oppdage flere mål. I dag er dominerende analyse teknikken høy ytelse flytende kromatografi (HPLC)14, kombinert med følsom elektrokjemiske15 eller fluorimetric gjenkjenning16, på grunn av dens høy følsomhet og god selektivitet. Med tandem massespektrometri teknologien, som flytende kromatografi/massespektrometri (LC/MS) og massespektrometri/massespektrometri med flytende Ture/mass (LC/MS/MS), analyse og kvantifisering av signalstoffer kan oppnå høy nøyaktighet og spesifisitet17,18. Men krever MS teknikken dyre instrumentering samt betydelig kvalifiserte arbeidskraft, gjør metoden vanskelig å gjelde universelt i de fleste konvensjonelle laboratorier. HPLC-ECD systemer er ofte utstyrt i mest konvensjonelle og kliniske laboratorier og har dermed blitt et vanlig valg for forskning holdene å bruke kjemiske besluttsomhet, men de krever prøven introdusert i systemet å være ren og av Mikroskala volum19. Dermed er det av stor betydning å rense og kondensere prøven før analysen. Den klassiske metoden for renselse trinn er væske-flytende utvinning14,15,20 og off-line solid-fase utvinning, inkludert aktivert alumina kolonnen21,22 og diphenylborate (DPBA), complexation,23,,24,,25,,26.

Myeongho Lee et al. ha blitt benytter polymer harpiks kjemisk endret med kronen Eter som adsorbent selektivt trekke ut katekolaminer fra menneskelige urin siden 200727. Også i 2006 Haibo han et al. demonstrert en lettvinte syntese tilnærming for boronate affinitet utvinning absorberende byutilizing functionalizable nanomagnetic polyhedral oligomeric silsesquioxane (EV) basert nanomagnetic sammensatt, og bruke det på anriking av katekolaminer i menneskelige urin (noradrenalin, adrenalin og isoprenaline)28. De tok fordel av nanomaterialer å oppfylle arbeidet, bruker en teknologi kalt nano-electrospinning og dannet polymer fibrøst materiale i nanoskala. Electrospinning prosessen kan justere diameter, morfologi og romlig justering av produktet ved å kontrollere arbeider spenningen og endre innholdet i spinning løsningen sammen med andre parametere29. Sammenlignet med konvensjonelle SPE kassetten, electrospun nanofibers er svært egnet til å trekke ut og berike målet analytter fra en kompleks matrise, som er utstyrt med høy overflate-område-til-volum forhold til adsorberes i analytter med høy effektivitet, og vise flere lett-kontrollerte overflaten kjemiske egenskaper, slik at praktiske vedlegg av målet forbindelser. Disse egenskaper gjør dem gode valg for SPE adsorbents, noe som reduserer solid fase og desorpsjon løsemiddel beløpet30,31,32,33. Katekolaminer i urinprøver, var electrospun nanofibers består av apolymeric krone Eter med polystyren (PCE-PS) pleide å selektivt ekstra tre katekolaminer (NE, E og DA)34. Avisen indikerte at selektiv crown Eter adsorbert mål for NE, E og DA, som var basert på riktig geometri for innbinding katekolaminer via danner hydrogenbindinger. Resultatene vises materiale crown Eter effektivt, fjerne andre forstyrrende forbindelser i biologiske prøver. Inspirert av denne rapporten, en roman metoden ble utviklet for selektiv utvinning av katekolaminer ved bruk av electrospun sammensatte nanofibers består av PCE-PS.

I denne utredningen rapportert metoden tidligere34 ble forbedret og ikke bare å analysere E, NE, og DA, men også deres metabolitter, MHPG og DOPAC, i urin. Vi har også utforske nye muligheter for mekanismen av adsorpsjon prosessen. Metoden viser tilfredsstillende utvinning effektivitet og selektivitet for de fem analytter, og metoden ble bekreftet i analyse av urin fra høy risiko spedbarn med perinatal hjerneskade og sunn kontroller.

Protocol

Informert samtykke fra foreldre ble innhentet, og institusjonelle gjennomgang styret godkjenning ble innhentet for studier. Studien ble utført i henhold til koden for etikk i World Medical Association (Helsinkideklarasjonen) for eksperimenter som involverte mennesker. Omsorgspersoner av alle deltakerne gitt skriftlig samtykke for å være inkludert i studien. Etisk komité godkjenning fra Zhongda sykehus, affiliate med Sørøst University, var også innhentet. 1. forberedelse kolonner og løsni…

Representative Results

Denne protokollen er en enkel og praktisk PFSPE metode pretreat urinprøver og berike fem katekolaminer for gjenkjenning via en såkalt HPLC-ECD systemet. et diagram av prosessen er vist i figur 1. Protokollen inneholder hovedsakelig fire trinn-aktivering, lasting, rense, og eluting – kombinert med en liten mengde PCE-PS nanofibers og en enkel solid-fase utvinning. Morfologi av PCE-PS nanofibers ble vurdert ved hjelp av en overflate og porøsitet analyzer (se…

Discussion

Den foreslåtte PFSPE metoden i dette dokumentet kan være betydelige og meningsfylt forhold til sin hurtighet, enkelhet og bekvemmelighet. Adsorbents brukes i protokollen er electrospun nanofibers, som har en høy overflate område-til-volum, og adsorberes i analytter med høy effektivitet. Prosedyren bare trenger noen milligram nanofiber og en liten mengde eluant løsemiddel og krever ikke en fordampning skritt å konsentrere seg på analytter. Her har vi presentert en detaljert oversikt over en såkalt HPLC-ECD basert…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Denne studien ble støttet av National Science Foundation av Kina (No.81172720, nr. 81673230), sosial utvikling forskning Program av Jiangsu provinsen vitenskap og avdelingen (nr. BE2016741), Science & Technology prosjekt av Kina General Administration of Quality tilsyn, inspeksjon og karantene (2015QK055), åpne prosjektet programmet nøkkel laboratorium for barns utvikling og læring naturfag i utdanningsdepartementet, Sørøst University (CDLS-2016-04). Vi anerkjenner oppriktig Yuan sang og Ping Liu som hjalp oss på eksempler samling.

Materials

200 µL pipette tip column to contain nanofibers
PCE-PS nanofibers material for PFSPE extraction
steel rod (about 0.5 mm diameter) fill the nanofibres into the column
gastight plastic syringe (5 ml) compress solution into the end of the tip
methanol Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 67-56-1
diphenylborinic acid 2-aminoethyl ester(DPBA) Sigma-Aldrich.Inc A-106408 complex reagent
norepinephrine(NE) Sigma-Aldrich.Inc A-9512 analyte
3-Methoxy-4-hydroxyphenylglycol(MHPG) Sigma-Aldrich.Inc H1377 analyte
epinephrine(E) Sigma-Aldrich.Inc 100154-200503 analyte
3, 4-Dihydroxyphenylacetic acid(DOPAC) Sigma-Aldrich.Inc D-9128 analyte
dopamine(DA) Sigma-Aldrich.Inc H-8502 analyte
3, 4-dihydroxybenzylamine hydrobromide(DHBA) Sigma-Aldrich.Inc 858781 interior label
acetonitrile Sigma-Aldrich.Inc 75-05-8 eluriant and mobile phase
phosphoric acid Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 7664-38-2 eluriant
uric acid Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 69-93-2 artifical urine
creatinine Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 60-27-5 artifical urine
trisodium citrate Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 6132-04-3 artifical urine
KCl Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 7447-40-7 artifical urine
NH4Cl Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 12125-02-9 artifical urine
NaHCO3 Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd SWC0140326 artifical urine
C2Na2O4 Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 62-76-0 artifical urine
NaSO4 Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 7757-82-6 artifical urine
disodium hydrogen phosphate Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 10039-32-4 artifical urine
urea Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 57-13-6 artifical urine
NaCl Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 7647-14-5 artifical urine
MgSO4.7H2O Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 10034-99-8 artifical urine
CaCl2 Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 10035-04-8 artifical urine
HCl Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 7647-01-0 artifical urine
citric acid Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 77-92-9 artifical urine and mobile phase
EDTA disodium salt Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 34124-14-6 mobile phase
monometallic sodium orthophosphate Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 7558-80-7 artifical urine and mobile phase
1-heptanesulfonic acid sodium salt Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 22767-50-6 mobile phase
sodium hydroxide Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 1310-73-2 mobile phase
phenylboronic acid column(PBA column) Aglilent 12102018 PBA extraction
Inertsil® ODS-3 5 µm 4.6×150 mm column Dikma 5020-06731 HPLC column for seperation
SHIMADZU SIL-20AC prominence AUTO SAMPLER Shimadzu Corporation, Japan SIL-20AC auto injection for eluriant
SHIMADZU LC-20AD High Performance Liquid Chromatography Shimadzu Corporation, Japan LC-20AD HPLC pump
SHIMADZU L-ECD-60A electrochemical detector Shimadzu Corporation, Japan L-ECD-60A detector for the analytes
ASAP 2020 Accelerated Surface Area and Porosimetry System Micromeritics, USA surface and porosity analyzer 
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Elhwuegi, A. S. Central monoamines and their role in major depression. Prog. Neuropsychopharmacol. Biol. Psychiatry. 28, 435-451 (2004).
  2. Da, C. F., Ngoabdalla, S., Houzel, J. C., Rehen, S. K. Murine model for Parkinsons disease: From 6-OH dopamine lesion to behavioral test. J. Vis. Exp. (35), e1376 (2010).
  3. Varley, H., Gowenlock, A. H. The clinical chemistry of monoamines. Brit. Med. J. 2, 1330 (1963).
  4. Wang, X., Rousset, C. I., Hagberg, H., Mallard, C. Lipopolysaccharide-induced inflammation and perinatal brain injury. Semin. Fetal. Neonatal. Med. 11, 343-353 (2006).
  5. Inder, T. E., Volpe, J. J. Mechanisms of perinatal brain injury. Semin. Neonatol. 5, 3-16 (2000).
  6. Miller, S. P., Ferriero, D. M. From selective vulnerability to connectivity: Insights from newborn brain imaging. Trends. Neurosci. 32, 496-505 (2009).
  7. Barkovich, A. J., et al. Proton MR spectroscopy for the evaluation of brain injury in asphyxiated, term neonates. Am. J. Neuroradiol. 20, 1399-1405 (1999).
  8. Liauw, L., van Wezel-Meijler, G., Veen, S., van Buchem, M. A., van der Grond, J. Do apparent diffusion coefficient measurements predict outcome in children with neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy?. Am. J. Neuroradiol. 30, 264-270 (2009).
  9. Varsami, M., et al. Inflammation and oxidative stress biomarkers in neonatal brain hypoxia and prediction of adverse neurological outcome: A review. J. Pediatr. Neonat. Individual. Med. 2, e020203 (2013).
  10. Cooper, R. L., Walker, R. F. Microradioenzymic assays for the measurement of catecholamines and serotonin. Methods. Enzymol. 103, 483-493 (1983).
  11. Murphy, J. F. The development of enzyme linked immunosorbent assays (ELISA) for the catecholamines adrenaline and noradrenaline. J. Immunol. Methods. 154, 89-98 (1992).
  12. Jones, S. R., Mickelson, G. E., Collins, L. B., Kawagoe, K. T., Wightman, R. M. Interference by pH and Ca2+ ions during measurements of catecholamine release in slices of rat amygdala with fast-scan cyclic voltammetry. J. Neurosci. Methods. 52, 1-10 (1994).
  13. Sanchismallols, J. M., Villanuevacamañas, R. M., Ramisramos, G. Determination of unconjugated catecholamine in urine as dopamine by thermal lens spectrometry. Analyst. 117, 1367-1371 (1992).
  14. Lan, C., Liu, W. Determination of catecholamines by HPLC-ECD in urine. Medical Laboratory Science and Clinics. , (2007).
  15. Tsunoda, M., Aoyama, C., Ota, S., Tamura, T., Funatsu, T. Extraction of catecholamines from urine using a monolithic silica disk-packed spin column and high-performance liquid chromatography-electrochemical detection. Anal. Methods. 3, 582-585 (2011).
  16. Bartolini, B., et al. Determination of monoamine oxidase activity by HPLC with fluorimetric detection. Neurobiology (Bp). 7, 109-121 (1999).
  17. Dunand, M., Gubian, D., Stauffer, M., Abid, K., Grouzmann, E. High throughput and sensitive quantitation of plasma catecholamines by ultraperformance liquid chromatography tandem mass spectrometryusing a solid phase microwell extraction plate. Anal. Chem. 85, 3539-3544 (2013).
  18. He, H., Carballo-Jane, E., Tong, X., Cohen, L. H. Measurement of catecholamines in rat and mini-pig plasma and urine by liquid chromatography-tandem mass spectrometry coupled with solid phase extraction. J. Chromatogr. B. 997, 154-161 (2015).
  19. Simon, N., Young, P. How to increase serotonin in the human brain without drugs. J. Psychiatry. Neurosci. 32, 394-399 (2007).
  20. Grossi, G., et al. Improvements in automated analysis of catecholamine and related metabolites in biological samples by column-switching high-performance liquid chromatography. J. Chromatogr. A. 541, 273-284 (1991).
  21. Iwamot, T., Yoshiura, M., Iriyama, K. Liquid chromatographic identification of urinary catecholamine metabolites adsorbed on alumina. J. Liq. Chromatogr. R. T. 10, 1217-1235 (1987).
  22. Maycock, P. F., Frayn, K. N. Use of alumina columns to prepare plasma samples for liquid-chromatographic determination of catecholamines. Clin. Chem. 33, 286-287 (1987).
  23. Grossi, G., Bargossi, A., Lippi, A., Battistoni, R. A fully automated catecholamines analyzer based on cartridge extraction and HPLC separation. Chromatographia. 24, 842-846 (1987).
  24. Rondelli, I., et al. New method for the resolution of the enantiomers of 5,6-dihydroxy-2-methyl-aminotetralin by selective derivatization and HPLC analysis: Application to biological fluids. Chirality. 8, 381-389 (1996).
  25. Kumar, A., Hart, J. P., McCalley, D. V. Determination of catecholamines in urine using hydrophilic interaction chromatography with electrochemical detection. J. Chromatogr. A. 1218, 3854-3861 (2011).
  26. Sabbioni, C., et al. Simultaneous liquid chromatographic analysis of catecholamines and 4-hydroxy-3-methoxyphenylethylene glycol in human plasma: Comparison of amperometric and coulometric detection. J. Chromatogr. A. 1032, 65-71 (2004).
  27. Lee, M., et al. Selective solid-phase extraction of catecholamines by the chemically modified polymeric adsorbents with crown ether. J. Chromatogr. A. 1160, 340-344 (2007).
  28. He, H., et al. Facile synthesis of a boronate affinity sorbent from mesoporous nanomagnetic polyhedral oligomeric silsesquioxanes composite and its application for enrichment of catecholamines in human urine. Anal. Chim. Acta. 944, 1-13 (2016).
  29. Subbiah, T., Bhat, G. S., Tock, R. W., Parameswaran, S., Ramkumar, S. S. Electrospinning of nanofibers. J. Appl. Polym. Sci. 96, 557-569 (2005).
  30. Hu, W. Y., et al. Packed-fiber solid-phase extraction coupled with high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry for determination of diethylstilbestrol, hexestrol, and diedestrol residues in milk. J. Chromatogr. B. 957, 7-13 (2014).
  31. Liu, Z., Kang, X., Fang, F. Solid phase extraction with electrospun nanofibers for determination of retinol and α-tocopherol in plasma. Microchim. Acta. 168, 59-64 (2010).
  32. Qi, D., Kang, X., Chen, L., Zhang, Y., Wei, H., Gu, Z. Electrospun polymer nanofibers as a solid-phase extraction sorbent for the determination of trace pollutants in environmental water. Anal. Bioanal. Chem. 390, 929-938 (2008).
  33. Kang, X. J., Chen, L. Q., Zhang, Y. Y., Liu, Y. W., Gu, Z. Z. Performance of electrospun nanofibers for SPE of drugs from aqueous solutions. J. Sep. Sci. 31, 3272-3278 (2008).
  34. Chen, L. Q., Wang, Y., Qu, J. S., Deng, J. J., Kang, X. J. Selective extraction of catecholamines by packed fiber solid-phase using composite nanofibers composing of polymeric crown ether with polystyrene. Biomed. Chromatogr. 29, 103-109 (2015).
  35. Chen, L. Q., Zhu, X. H., Shen, J., Zhang, W. Q. Selective solid-phase extraction of catecholamines from plasma using nanofibers doped with crown ether and their quantitation by HPLC with electrochemical detection. Anal. Bioanal. Chem. 408, 4987-4994 (2016).
  36. Hu, H., Zhang, Y., Zhang, Y., Huang, X., Yuan, D. Preparation of a new sorbent based on boronate affinity monolith and evaluation of its extraction performance for nitrogen-containing pollutants. J. Chromatogr. A. 1342, 8-15 (2014).
  37. Chen, J., et al. Sensitive determination of four camptothecins bysolid-phase microextraction-HPLC based on a boronic acid contained polymer monolithic layer. Anal. Chim. Acta. 879, 41-47 (2015).
  38. Li, D., Chen, Y., Liu, Z. Boronate affinity materials for separation and molecular recognition: structure, properties and applications. Chem. Soc. Rev. 44, 8097-8123 (2015).
  39. Yan, J., Springsteen, G., Deeter, S., Wang, B. The relationship among pKa, pH, and binding constants in the interactions between boronic acids and diols: It is not as simple as it appears. Tetrahedron. 60, 11205-11209 (2004).
  40. Reuster, T., Rilke, O., Oehler, J. High correlation between salivary MHPG and CSF MHPG. Psychopharmacology. 162, 415-418 (2002).
  41. Beckmann, H., Goodwin, F. K. Urinary MHPG in subgroups of depressed patients and normal controls. Neuropsychobiology. 6, 91-100 (1980).
  42. Mitoma, M., et al. Stress at work alters serum brain-derived neurotrophic factor (BDNF) levels and plasma 3-methoxy-4-hydroxyphenylglycol (MHPG) levels in healthy volunteers: BDNF and MHPG as possible biological markers of mental stress?. Prog. Neuropsychopharmacol. Biol. Psychiatry. 32, 679-685 (2008).
  43. Ressler, K. J., Nemeroff, C. B. Role of Norepinephrine in the Pathophysiology and Treatment of Mood Disorders. Biol. Psychiatry. 46, 1219-1233 (1999).
  44. Alonso-Spilsbury, M., et al. Perinatal asphyxia pathophysiology in pig and human: A review. Anim. Reprod. Sci. 90, 1-30 (2005).
  45. Shalak, L., Perlman, J. M. Hypoxic-ischemic brain injury in the term infant: Current concepts. Early. Hum. Dev. 80, 125-141 (2004).
  46. Maas, J. W., Leckman, J. F. relationships between central nervous system noradrenergic function and plasma and urinary MHPG and other norepinephrine metabolites. MHPG: Basic Mechanisms and Psychopathology. , 33-43 (1983).
  47. Maas, J. W. Relationships between central nervous system noradrenergic function and plasma and urinary concentrations of norepinephrine metabolites. Adv. Biochem. Psychopharmacol. 39, 45-55 (1984).
  48. Peyrin, L., Pequignot, J. M., Chauplannaz, G., Laurent, B., Aimard, G. Sulfate and glucuronide conjugates of 3-methoxy-4-hydroxyphenylglycol (MHPG) in urine of depressed patients: Central and peripheral influences. J. Neural. Transm. 63, 255-269 (1985).
  49. Peyrin, L. Urinary MHPG sulfate as a marker of central norepinephrine metabolism: A commentary. J. Neural. Transm. 80, 51-65 (1990).

Tags

High-pressure Liquid ChromatographyCatecholamine NeurotransmittersMetabolitesSolid-phase ExtractionElectrochemical DetectionMonoamine NeurotransmittersInfant’s UrineDPBA SolutionNorepinephrineEpinephrineDopamineMHPGDOPACDHBAHydrochloric AcidAnalyte Stocks

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Cite This Article
Xie, L., Chen, L., Gu, P., Wei, L., Kang, X. A Convenient Method for Extraction and Analysis with High-Pressure Liquid Chromatography of Catecholamine Neurotransmitters and Their Metabolites. J. Vis. Exp. (133), e56445, doi:10.3791/56445 (2018).
Download Citation
Reprints and Permissions

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image