Summary
פרוטוקול זה מתאר של assay הפוכה הפלישה אנכי יכול לשמש כדי לכמת את יכולות העברת ופלישה של תאים בתוך תפאורה תלת מימדי תוך שמירה על microenvironment תא. Assay הזה מתאים תאים נדירים ו/או רגישים.
Abstract
למרות הפלישה 3D מבחני פותחו, האתגר נשאר ללמוד תאים מבלי להשפיע על microenvironment שלהם התקינות. מבחני 3D מסורתיים כגון תא בוידן דורשים כי תאים שנעקרו מהמיקום תרבות המקורי ועבר למעבר לסביבה חדשה. לא רק זה לשבש תהליכים הסלולר הם מהותי microenvironment, אבל לעתים קרובות התוצאה היא איבוד תאים. הבעיות הללו הן מאתגר במיוחד בהתמודדות עם תאים שהם נדירים או רגישים ביותר שלהם microenvironment. כאן, אנו מתארים את התפתחות assay הפלישה תלת-ממד זה מונע שני חששות. זה assay, התאים הם מצופים במרחק קטן. ובכן, מטריקס ECM המכיל chemoattractant מונחת על גבי התאים. זה דורש אין הזחה תא, וזה מאפשר לתאים לפלוש כלפי מעלה לתוך המטריקס. ב הזה assay, הפלישה תא, כמו גם תא מורפולוגיה יכול להידרש בתוך הג'ל קולגן. שימוש assay הזה, נוכל לאפיין את הקיבולת פולשנית של תאים נדיר ורגיש; התאים היברידית הנובע היתוך בין תאים סרטניים בשד MCF7 mesenchymal/multipotent תאי גזע/משתית (MSCs).
Introduction
תא תנועתיות הוא תהליך התפתחותי פיזיולוגי נורמלי של תאים. עם זאת, שינויים התבנית ואת היכולת של תאים נודדים ולאחר לפלוש הקשורים עם מצבים פתולוגיים כולל מחלות דלקתיות, סרטן גרורות1,2,3. גרורות שדפדפן הוא ההיבט ביותר ממעטים להבין סרטן. כדי גרורות, תאים סרטניים חייבים לבזות את המטריצה סלולרית נוספת (ECM), לפלוש את הרקמה המקומית ואת intravasate. פעם אחת בכל מחזור הדם, התאים הסרטניים להפיץ לאתר מרוחק, בורחת ויוצרים גידולים משניים. לכן, היכולת של תאים כדי לבזות את ECM, כדי להעביר, לפלוש קשורה הפוטנציאל גרורתי שלהם. גישות שונות פותחו כדי לנתח ולכמת את יכולות העברת ופלישה של תאים. הגישות הנפוצה ביותר כוללים את הפצע ריפוי assay, מיקרוסקופיה זמן לשגות ואת וזמינותו קאמרית בוידן. הפצע הריפוי assay4 וזמן לשגות מיקרוסקופ הם מבחני פשוט ונוח שיכול לתת תובנה נדידת תאים ראשוניים. עם זאת, שניהם נמצאים מבחני 2D אשר אינן משקפות את סביבת 3D שבו קיימים תאים ויוו. מחקרים הראו כי התאים מגיבים באופן שונה סביבת 3D לעומת5,אחד62D. יתר על כן, מבחני ריפוי הפצע קשים כדי להתרבות, להניב תוצאות כמותיות-7,-8,-9. וזמינותו תא הדרה, המהווה שינוי תלת-ממדית של הפצע ריפוי assay, וזמינותו רלוונטי יותר מבחינה פיזיולוגית אבל זה לא מתאים התאים נמוך במספר כגון תאים היברידית הנובע תא פיוז'ן אירועים10,11 .
וזמינותו קאמרית בוידן הוא assay תלת-ממדי המספק microenvironments הרלוונטי ללימודי הסלולר. עם זאת, זה דורש תאים כדי להסיר את microenvironment המקורי שלהם וכדי לאוגרים התא העליון של מערכת assay בוידן נודדים, לפלוש כלפי מטה לכיוון המדיום המכיל chemoattractant. גישה זו 3D אינו מתאים ולנתח את יכולת העברה ופלישה של תאים לפגיע שלהם microenvironment ו/או מוגבל מספר10,11,12. גישת כדי לנתח נדידת תאים ואת הפלישה הוא microfluidic קאמרית הדרגתיות assay13. למרות מתאים ואמין בלימודי הגירה ופלישה, וזמינותו זה יקר יותר, יכול להיות מאתגר מבחינה טכנית עבור מעבדה טיפוסי. נתאר כאן וזמינותו פשוטה הפלישה אנכי הפוך זה תואם עם סוגי תאים רבים, כולל תאים רגישים microenvironment שלהם ו/או מוגבלים במספר. Assay הזה היה ממאמרו של הפרוטוקול המוצע על ידי הופר. et al. 14. זה assay, התאים נשארים microenvironment המקורי שלהם, ההגירה שלהם ואת הפלישה מנוטר כפי שהם לנוע כלפי מעלה הג'ל קולגן המכיל של chemoattractant11. זה וזמינותו היא לשחזור, אופטימיזציה, מאומת בצלחת תרבות 35 מ מ. זה יכול להיות מותאם תנאים assay שונים לרבות גדלים התרבות תאים שונים, מטריצות שונות או חוזק הדבקה, chemoattractants שונים. Assay הזה יכול לשמש פלטפורמה במבחנה להקרנה הראשוני בתהליך הגילוי סמים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
הערה: פרוטוקול זה המתואר מקארדל. et al. 11. ציר זמן מסופק באיור1.
1. הכנת לוח תרבות
- לשטוף את המנה 35 מ מ תרבות המכילה זכוכית 10 מ מתחתון עם 1 מ"ל של 1 מ' חומצת מימן כלורי (HCl) למשך 15 דקות להוריד את hydrophobicity של הזכוכית-התחתון.
- לשטוף את הצלחת תרבות פעמיים עם 1 מ ל תמיסת מאגר פוספט (PBS) כדי להיפטר כל HCl.
- לשטוף את הצלחת תרבות פעמיים עם 1 מ"ל אתנול 70%.
- לשטוף לצלחת תרבות עם 1 מ"ל של המדיום התרבות תאים ספציפיים (כאן, α שימוש-בתוספת 10% חום MEM להשבית FBS וחומצות אמינו שאינן הכרחיות 1%).
הערה: ניתן לאחסן את הצלחת תרבות שטופלו המכיל המדיום תרבות בחממה2 CO עם מכשיר לחות ב 37 ° C עד למחרת. - לגדול התאים (MSCs ו- MCF-7 תרבות משותפת) בתחתית הכוס שטופלו טוב של המנה תרבות 35 מ מ 100% confluency. שיתוף התרבות תאים MSC 35,000, 75,000 MCF7 תאים עבור 24 שעות.
2. הכנה של הג'ל קולגן
- אחסן את העצות micropipette משמש pipetting את הג'ל קולגן במקפיא כדי למנוע את פלמור של הקולגן לאחר יצירת קשר.
הערה: זהו השלב הקריטי ביותר. - לקבוע אמצעי אחסון של קולגן זנב עכבר כדי לשמש מבוסס על הריכוז של המניה קולגן. היכונו µL 100 של קולגן ג'ל זה וזמינותו.
הערה: ריכוז גבוה של קולגן זנב העכברוש אני מדמין עובד יותר טוב... קבע את עוצמת הקול של 10 x בינוני ששינה הנשר של Dulbecco כדי לשמש כדי לדלל את הקולגן בהתאם. - לשלב על הקרח עכברוש הזנב קולגן אני (3.8 µg/mL במלאי), ששינה הנשר של Dulbecco x 10 בינוני 1 x תא תרבות בינוני בתוספת 2% סרום שור עוברית, את chemoattractant המתאים כדי ריכוז סופי של קולגן של 2.4 mg/mL.
- להוסיף התערובת 4.5% של סודיום ביקרבונט פתרון כדי לנטרל את הג'ל קולגן.
הערה: הנפח של הפתרון סודיום ביקרבונט הוסיף עשויות להשתנות בהתבסס על רמת ה-pH המדויק של ריאגנטים אחרים. מומלץ לבחון את התערובת עם חומציות להבטיח פתרון נייטרלי, או להשתמש מחוון ה-pH בטווח הבינוני תרבות. - שכבה µL 80 של תערובת קולגן מעל התאים בתוך הזכוכית-התחתון טוב של המנה תרבות.
- לאפשר את הג'ל קולגן פולימריזציה למשך 30 דקות ב- חממה2 CO עם מכשיר לחות ב 37 º C.
- מכסה את הג'ל קולגן עם 2 מיליליטר תא בינוני עם מופחת סרום (2%), דגירה התאים ב- 37 מעלות צלזיוס חממה2 CO עם מכשיר אדים 24, 48 או 72 h.
התראה: הצלחת שצריך לנהוג בזהירות כדי למנוע את הג'ל קולגן מתנתקת מהחלק התחתון זכוכית.
3. דוגמה הכנה של קולגן ג'ל באמצעות קולגן זנב העכברוש מלאי של 3.8 µg /mL
- על קרח, לשלב 114.5 µL של קולגן זנב החולדה, 16.6 µL של 10 x DMEM, µL 33.1 של תרבות בינוני המכיל את chemoattractant.
- לנטרל את התערובת קולגן עם µL 14.0 של סודיום ביקרבונט.
- המשך כמו שלב 2.5.
4. הדמיה של תאים
- הסר בעדינות את המדיה מתוך קערה.
- יש לשטוף בעדינות את הג'ל עם 1 מ"ל ל- PBS.
- לתקן את התאים עם 1 מ"ל של 4% paraformaldehyde למשך 15 דקות.
- לשטוף את התאים פעמיים עם 1 מ"ל ל- PBS.
- כתם התאים עם פתרון דאפי (100 ng/mL) במשך 20 דקות בטמפרטורת החדר.
- תמונה התאים באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי במקומות שונים ולקחת 400 תמונות z-מחסנית מיקרומטר של כל מיקום 16 שלבים מיקרומטר. המיקרוסקופ משמש יש דיסק סריקה יחידה המאפשרת הדמיה קונאפוקלית באמצעות של אור לבן, מקור עירור קשת. השתמש עדשה X 20 מנוצל עם מספרי הצמצם של 0.75.
- לשקם תמונות.
- לפתוח תמונות עבור ג'ל נתון (כ 25 תמונות) וליצור אוסף תמונות על ידי לחיצה על תמונה ← ערימות ← תמונות לערום. התמונה הראשונה התכתב לתחתית של הג'ל (z = 0 מיקרומטר), התמונה השניה תאמו הצעד הראשון בכיוון z (z = 16 מיקרומטר), בתמונה השלישית התכתב לשלב השני בכיוון z (z = מיקרומטר 32). להעריך כל גרעין בעומק התמונה כל ולייעד את העומק שבו הגרעין היה בפוקוס החדה כמו עומק חדירה לתא מסוים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
השתמשנו לצלחת תרבות 35 מ מ עם קולגן הזנב הזכוכית התחתונה ועכבר כדי לפתח, לייעל את פלישה במבחנה 3D assay פרוטוקול. שימוש assay הזאת, הראנו את השד תאים סרטניים MCF7, MSC תאים יכול לפלוש לתוך הג'ל קולגן מרחק ממוצע של 0.04 ± 1.8 מיקרומטר ו 41.3 ± 76.0 מיקרומטר בהתאמה לאחר 48 שעות כאשר IGF1 (18.6 ng/mL) שימש chemoattractant (איור 2). וחשוב מכך, הראינו כי fusion מוצרי מתאי MSC ו MCF7, אשר הם תאים נדיר, יכול לפלוש לתוך הג'ל קולגן וכן... מרחק ממוצע של פלישה 48 שעות היה 10.7 ± 12.4 מיקרומטר IGF. אני ב- 18.6 ng/mL שימש chemoattractant (איור 2). ההבדל בין MCF7 לבין MSCs היכולת הפלישה הייתה משמעותית מבחינה סטטיסטית (P < 0.01)11. ההבדל בין היכולת הפלישה של המוצרים פיוז'ן של אחד MCF7 או MCSs לא היה משמעותי סטטיסטית. עם זאת, זה וזמינותו בעקביות הראו כי המוצרים פיוז'ן התא סרטן היה יכולת הנדידה ופולשני גדול יותר מאשר התאים הסרטניים הורים, MCF7.
תאים נותרו בריאים לאורך הניסויים כפי שמוצג על ידי שלהם מורפולוגיה וכמות 48 שעות פוסט ג'ל הפילמור (איור 3). עם העיצוב assay הפלישה הפוך אנכית, ניתן קינטיקה של נדידת תאים, הפלישה שנותחה (איור 3ב', 4), מורפולוגיה תאים יכולים להיות מוערך (איור 4).
איור 1 : ציר הזמן של העיצוב assay הפוכה הפלישה אנכי אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 2 : הפלישה יכולת של סרטן התא פיוז'ן מוצרים- הקיבולת הפלישה של סרטן התא פיוז'ן מוצרים יכול להיקבע באמצעות וזמינותו הפלישה הפוך אנכית. המספרים מייצגים את הקיבולת הפלישה ממוצע של ארבעה מוצרים פיוז'ן עצמאית של שלוש התרבויות שותף נפרד וקווים תא הורים שלהם ניתח מתחומים שונים שמונה בתוך כל וזמינותו. הניסוי בוצע דולר. אנובה עם הבדיקה לאחר הוק של Tukey HSD. * * P < 0.01. קווי שגיאה לייצג סטיית תקן (SD). איור זה כבר ממאמרו של 11. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 3 : תא הכדאיות ואת סדרת Z וזמינותו הפלישה אנכי הפוך.
a) 20 תמונות שדה בהיר של X, מציג המורפולוגיה של תאי תחת הקולגן ג'ל לאחר יומיים. משמאל MCF7 נכון MSC תרבות משותפת, MCF7 ושל MSC; b) ייצוג של סדרת z מציג שני מיקומים (i ו- ii) בתוך תבשיל מלמטה למעלה. תמונות עוקבות הן בהפרש 16 מיקרומטר. 3.8% FBS שימש של chemoattractant. ירוק עיגולים על שני לוחות לציין תאים הפולשים; הערה, ממוקד בחלק התחתון של הג'ל, בפוקוס הג'ל העליון, פולשים לתוך הג'ל. עיגולים אדומים על שני לוחות מציינים בתאי שנותרה על השכבה התחתונה של סדרת z (תאים שאינם פולשים). סרגל קנה מידה (א): 15 מיקרומטר; קנה המידה של בר (b): 10 מיקרומטר. איור זה כבר ממאמרו של 11. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 4 : תא מורפולוגיה ב וזמינותו הפלישה אנכי הפוך. המורפולוגיה של MSCs הג'ל קולגן במיקום אחד מלמטה (Z = 0 מיקרומטר) ת = 20 מיקרומטר. 3.8% FBS שימש של chemoattractant. החץ הארוך מצביע על תוספת של MSC פולשים לתוך הג'ל. החץ מצביע על תואר, שהוא מסודרים לאורך החלק התחתון של הג'ל, וגם לא פולשים. הכחול מציג את הכתם דאפי גרעינית בעוד האדום מראה על חוטים אקטין phalloidin צבעונית. איור זה כבר ממאמרו של 11. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
כאן, אנו מתארים וזמינותו פשוט הפוך הפלישה אנכי אשר נוח עבור מגוון רחב של סוגי תאים כולל תאים שהם נדירים ו/או תלויים microenvironment שלהם. זה assay הפלישה תלת-ממד, תאים נשארים microenvironment המקורי שלהם, מכוסים על ידי הג'ל קולגן המכיל של chemoattractant. לאחר מכן, התאים נודדים, לפלוש ב הקולגן. זה assay, התאים יכולים להיות מוכתם, פיקוח בקלות בתוך הג'ל. הפשטות ואת הפארמצבטית של assay זו הופכת כלי נוח ללמוד נדידת תאים סרטן ופלישה במערכת תלת-ממד. עם זאת, chemoattractants חזק נראה להיות נדרש כדי לשבור את הזיקה תא לתחתית של המנה תרבות.
אנחנו אופטימיזציה וזמינותו הפוך אנכית הפלישה לתוך המנה תרבות 35 מ מ. זה תרבות מאכל יש זכוכית 10 מ מתחתון טוב אשר מצויד היטב עבור הדמיה. מגבלה אחת של זה מאכל תרבות הוא כמות ניכרת של ג'ל קולגן, הנדרש לשם ביצוע וזמינותו. מציאת מנות תרבות קטנים יותר עם עיצוב תואם הדמיה יהיה חסכוני יותר. שכבת ג'ל המתאים על עיצוב המנה 35 מ מ הינה עדינה מאוד בשל עוצמתה, ניתן לנתק בקלות מהחלק התחתון של הלוח אם לא יטפלו בזהירות. בעיצוב התרבות תאים שונים עשוי לשפר את היציבות של שכבת ג'ל קולגן אבל צריך ניתן למטב את התאימות בין קולגן ג'ל הכדאיות תא ועוצמתה.
למרות מגבלות אלו, וזמינותו הפוכה הפלישה אנכי מציג יתרונות רבים בהשוואה לתבניות אחרות assay הפלישה תלת-ממד. היתרון העיקרי הוא כי התאים נשארים בסביבה המקורית שלהם תרבות, וזה לא במקרה של בוידן קאמרית וזמינותו. פרוטוקול זה משמר את microenvironment תא זה יתרון עבור תאים והטכני בשליטת שלהם microenvironment כגון תאי גזע15. Assay זה גם מונע נזק לתאים או איבוד תאים במיוחד עבור תאים שהם עדין או נדירים10,11. בנוסף, עם זה assay, מורפולוגיה תאים וקינטיקה המשויך יכול להידרש בתוך הג'ל, אשר אינו אפשרי עם בוידן קאמרית וזמינותו. יתר על כן, פוליקרבונט הפיזיולוגיות או פוליפרופילן לסנן של מערכת assay קאמרית בוידן אינו בשימוש וזמינותו הפלישה הפוך אנכית. וזמינותו הפוכה הפלישה אנכי הוא עיצוב סטטי, זה אינה מחקה ויוו דינאמיות הסביבה המציעה עיצוב assay הפלישה microfluidic אבל הוא מספק פשוט יותר, פחות מאתגר וחסכונית סביבה תלת-ממד כדי לכמת הגירה, הפלישה מגוון רחב של סוגי תאים ב- microenvironment שהשתמרו ומבוקר.
וזמינותו הפלישה אנכי הפוכה יש יישומים פוטנציאליים רבים במחקרים הקשורים pathophysiological. גישה זו יכולה לשמש פלטפורמה במבחנה ללמוד תנועתיות תא במהלך התפתחות עובריים, פצע מרפא, ו/או תגובות דלקתיות3. תא אינטראקציה עם ECM, סוגי תאים אחרים במהלך ההעברה, הפלישה יכול גם להיות חקר באמצעות פרוטוקול זה. Assay זה יכול לייצג גם כלי שימושי עבור הראשונית והתרופות הקרנה של תרופות אנטי גרורתי. ניתן לפתח מערכת מודל של גרורות סרטן ייחודיים באמצעות וזמינותו הפלישה אנכי הפוכה כמו גם.
וזמינותו הפלישה אנכי הפוכה פותחה כדי לעקוף את האתגר המציג העקירה של כמה תאים microenvironment המקורי שלהם במערכת assay קאמרית בוידן. Assay הזה הוא קל, אמין לשחזור; הוא גמיש, יכול לשמש כדי לכמת את הפוטנציאל פולשנית של מגוון רחב של סוגי תאים כולל סוגי תאים רגיש ונדיר. Assay הזה יכול להיות מיושם לאתר הפעילות נודדות המשויך מטריקס השפלה, יכול גם להיות מותאם כדי לחקור את פעילות משפילים סלקטיבית על מצעים שונים מטריקס.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
המחברים הכריזו כי אין עניין מתחרים קיימים.
Acknowledgments
עבודה זו נתמכה על ידי מכוני הבריאות הלאומיים (NIMHD-G12MD007581) דרך RCMI-המרכז לבריאות הסביבה ג'קסון סטייט, ארה ב. משרד הביטחון, בפרס Idea 11-1-0205.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| MatTek P35G-1.5-10C | MatTek Corporation, Ashland, MA | P35G-1.5-10-C | mattek glass bottom dishes |
| Rat tail collagen I | Corning, Corning, NY, USA | 354236 | Collagen gel |
| Hydrochloric acid | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63178 USA | H1758 | HCl |
| Phosphate buffered saline | Thermo Fisher Scientific Inc., Whaltham, MA, USA | 10010023 | PBS |
| 10X Dulbecco's Modified Eagle's Medium | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63178 USA | D2429 | 10X DMEM |
| Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63178 USA | S5761 | NaHCO3 |
| Confocal Fluorescent microscope | Olympus America, Center Valley, PA, USA | Olympus IX81 | Confocal microscope |
| Defined Fetal Bovine Serum | GE Healthcare Life Sciences HyClone Laboratories, Utah, USA | SH30070.03 | FBS |
| Ti:Sapphire multi-photon laser scanning microscope | Prarie Technologies, Sioux Falls, SD, USA | 40x NA 0.8 objective | MPLSM |
| Imaris software | Bitplane Inc. Zurich, CH | Imaris 7.5.2 | Imaris software |
| DAPI | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63178, USA | D9542 | DAPI |
| Paraformaldehyde | Thermo Fisher Scientific Inc., Whaltham, MA, USA | 50980487 | PFA |
| α-minimum essential medium | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63178, USA | M0894 | |
| MDA-MB-231 | ATCC; Manassas, VA, USA | HBT-22 | |
| MSC | Trivedi and Hematti, 2007 | ||
| 20X lens UPLAPO | Olympus America, Center Valley, PA, USA | 36-064 | Olympus UPLSAPO 20X Objective |
References
- Friedl, P., Brocker, E. B. The biology of cell locomotion within three-dimensional extracellular matric. Cell Mol Life Sci. 57, 41-64 (2000).
- Bissell, M. J., Rizki, A., Mian, I. S. Tissue architecture: the ultimate regulator of breast epithelial function. Curr Opin Cell Biol. 15, 753-762 (2003).
- Friedl, P., Wolf, K. Tumour-cell invasion and migration: diversity and escape mechanisms. Nat Rev Cancer. 3, 362-374 (2003).
- Yarrow, J. C., Perlman, Z. E., Westwood, N. J., Mitchison, T. J. A high-throughput cell migration assay using scratch wound healing, a comparison of image-based readout methods. BMC Biotechnol. 4, 21 (2004).
- Wolf, K., et al. Compensation mechanism in tumor cell migration: mesenchymal-amoeboid transition after blocking of pericellular proteolysis. J Cell Biol. 160, 267-277 (2003).
- Sahai, E., Marshall, C. J. Differing modes of tumour cell invasion have distinct requirements for Rho/ROCK signalling and extracellular proteolysis. Nat Cell Biol. 5, 711-719 (2003).
- Kam, Y., Guess, C., Estrada, L., Weidow, B., Quaranta, V. A novel circular invasion assay mimics in vivo invasive behavior of cancer cell lines and distinguishes single-cell motility in vitro. BMC Cancer. 8, 198 (2008).
- Staton, C. A., Reed, M. W., Brown, N. J. A critical analysis of current in vitro and in vivo angiogenesis assays. Int J Exp Pathol. 90, 195-221 (2009).
- Poujade, M., et al. Collective migration of an epithelial monolayer in response to a model wound. Proc Natl Acad Sci USA. 104, 15988-15993 (2007).
- Noubissi, F. K., Harkness, T., Alexander, C. M., Ogle, B. M. Apoptosis-induced cancer cell fusion: a mechanism of breast cancer metastasis. FASEB J. 29, 4036-4045 (2015).
- McArdle, T. J., Ogle, B. M., Noubissi, F. K. An In Vitro Inverted Vertical Invasion Assay to Avoid Manipulation of Rare or Sensitive Cell Types. J Cancer. 7, 2333-2340 (2016).
- Noubissi, F. K., Ogle, B. M. Cancer Cell Fusion: Mechanisms Slowly Unravel. Int J Mol Sci. 17, (2016).
- Meyvantsson, I., Beebe, D. J. Cell culture models in microfluidic systems. Annu Rev Anal Chem. 1, 423-449 (2008).
- Hooper, S., Marshall, J. F., Sahai, E. Tumor cell migration in three dimensions. Methods In Enzymol. 406, 625-643 (2006).
- Yang, C., Tibbitt, M. W., Basta, L., Anseth, K. S. Mechanical memory and dosing influence stem cell fate. Nat Materials. 13, 645-652 (2014).
