Este trabalho apresenta um método para executar uma optogenetic unidade única gravação confiável de um rato acordado usando um optrode de vidro sob medida.
É uma grande preocupação em neurociência como diferente tipos de neurônios funcionam em circuitos neurais. Avanços recentes em optogenetics permitiram a identificação do tipo neuronal na vivo eletrofisiológicos experiências em regiões do cérebro amplo. Em experimentos de optogenetics, é essencial para fornecer a luz para o local de gravação. No entanto, muitas vezes é difícil entregar-se a luz de estimulação às regiões profundas do cérebro da superfície do cérebro. Especialmente, é difícil para a luz de estimulação atingir as regiões profundas do cérebro quando a transparência óptica da superfície do cérebro é baixa, como é frequentemente o caso com gravações de animais acordados. Aqui, descrevemos um método para gravar respostas de pico à luz de um rato acordado usando um optrode de vidro sob medida. Neste método, a luz é fornecida através do eléctrodo de vidro de gravação é possível estimular confiantemente o neurônio gravado com luz nas regiões profundas do cérebro. Este sistema de optrode sob medida consiste de materiais acessíveis e baratos e é fácil de montar.
O sistema nervoso central consiste de vários tipos de neurônios, que têm funções diferentes. Como esses diferentes tipos de neurônios funcionam dentro do circuito neural é uma das principais preocupações da neurociência. No entanto, em muitas regiões do cérebro, tem sido impossível distinguir os tipos neuronais em gravações na vivo de actividades eléctricas, porque não há nenhuma diferença clara no sinal elétrico spike em si, com algumas exceções. Avanços recentes em optogenetics fizeram uma descoberta1,2. Usando animais transgénicos na qual opsin sensíveis à luz (por exemplo, channelrhodopsin-2) é expressa em tipos específicos de neurônios, tornou-se possível distinguir os tipos neuronais eficientemente na vivo gravações3, 4,5,6. Nestes animais, os neurônios com opsin sensíveis à luz estão animados, dando estímulos de luz durante as gravações elétricas, mas outros neurônios não são. Os neurônios opsin-positivo, portanto, facilmente são distintos dos outros tipos de neurônio por suas respostas à luz.
Em experimentos de optogenetics, é essencial para fornecer a luz para o local de gravação. Como um método não-invasivo, a luz é muitas vezes dirigida da superfície do cérebro. No entanto, porque a força da luz reduz conforme passa pelo tecido cerebral, é difícil estimular as regiões cerebrais profundas da superfície do cérebro. Especialmente, é difícil para a luz de estimulação atingir as regiões profundas do cérebro quando a transparência óptica da superfície do cérebro é baixa, como é frequentemente o caso com gravações de animais acordados. Eletrofisiológicos experimentos frequentemente foram realizados em animais anestesiados porque o movimento do corpo provoca ruído nas gravações. Como está bem documentado, no entanto, anestesia é conhecida para alterar as respostas neurais7,8,9,10. Assim, é necessário utilizar animais acordados para estudar as respostas neurais, sem os efeitos artificiais da anestesia. Ao contrário das experiências com animais anestesiados, as gravações eletrofisiológicas são executadas após a recuperação da cirurgia nos experimentos com animais acordados. Durante o intervalo entre a cirurgia e as gravações, o exsudato tecido frequentemente se acumula na superfície do cérebro e faz com que a transparência óptica da superfície do cérebro baixa.
Aqui, descrevemos um método para gravar gravações unitárias de um rato acordado usando um optrode de vidro sob medida. Neste método, a luz é fornecida através do eléctrodo de vidro de gravação é possível estimular confiantemente o neurônio gravado com luz em regiões profundas do cérebro. Este sistema de optrode sob medida consiste de materiais acessíveis e baratos e é fácil de montar.
Optogenetics tornou-se uma ferramenta poderosa em neurociência. Ele tem sido utilizado para identificar neurônio específico tipos na vivo , bem como manipular as atividades das vias neuronais específicas. O esclarecimento da actividade neural de diferentes tipos neuronais promove a compreensão do mecanismo dos circuitos neurais. Aqui, temos demonstrado um método para fornecer a luz para o local de gravação através de um eléctrodo de vidro na IC de ratos de VGAT-ChR2 acordados.
<p class="jove_conten…The authors have nothing to disclose.
Os autores foram apoiados pela sociedade de Japão para a promoção da ciência KAKENHI Grant JP16K11200 e 17H 02223 e o subsídio para a pesquisa da universidade médica S2016 de Kanazawa-8 e C2017-3. Yuhichi Kuda Agradecemos seu apoio em tirar as fotos.
Electrode holder | Molecular Device | 1-HL-U | pipette holder for microelectrode amplifier |
Ceramic split mating sleeve | Thorlabs | ADAF1 | f2.5 mm ferrule |
Circuit board spacer | Teishin Denki | SPA-320 | f8.0 mm, 20.0 mm long |
Stereotaxic frame for mice | Narishige | SR-6M-HT | Stereotaxic instruments for mice |
Manipulator | Narishige | NA | Manual manipulator |
Superbond | Sun Medical | M: 204610557 | Dental adhesive resin cement |
Form2 | Formlabs | NA | 3D printer |
Kwik-Sil | WPI | KWIK-SIL | Low toxicity silicone adhesive |
Borosilicate glass capillaries | Narishige | GD-1.5 | OD 1.5 mm, ID 0.9 mm, 90.0 mm long |
Fiber-optic patch cord | Doric Lenses | MFP_960/1000/2200-0.63_1m_FCM-ZF2.5 | Monofiberoptic patchcord, OD, 2.5 mm, core = 960 mm, cladding = 1000 mm, NA = 0.63 |
Connectrized LED | Doric Lenses | LEDC-1B_FC | Central wave length = 465 nm, output power = 45 mW (Core 960 mm 0.63 NA ) |
LED driver | Doric Lenses | LEDRV_1CH_1000 | 1 ch LED driver, maximum output = 1000 mA |
Electrode puller | Narishige | PB-7 | Dual-stage glass micropipette puller |
Borosilicate glass capillary | Narishige | GD-1.5 | Bolosilicate glass capillary, OD, 1.5mm, ID, 0.9 mm, 90.0 mm long |
GENTACIN | MSD CO., Ltd | 185711173 | Antibiotic ointment |
Terramycin®-LA | Zoetis | G 333 | Oxytetracycline |
Tg(Slc32a1- COP4*H134R/EYFP)8Gfng/J | Jackson Labs | #14548 | VGAT-ChR2 mice |
Multiclamp 700B | Molecular Devices | 2500-0157 | Microelectrode amplifier |