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JoVE Encyclopedia of Experiments
Encyclopedia of Experiments: Biology

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बढ़ते वयस्क ड्रोसोफिला दिमाग

 
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बढ़ते वयस्क ड्रोसोफिला दिमाग: कॉन्फोकल इमेजिंग के लिए स्लाइड तैयार करने के लिए एक विधि

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- सकारात्मक रूप से चार्ज किए गए माइक्रोस्कोप स्लाइड पर, ड्रोसोफिला दिमाग को घुड़सवार करने के लिए पर्याप्त दूरी के साथ दो कवर स्लिप का पालन करें। स्टीरियो माइक्रोस्कोप के तहत, उस स्थान में बढ़ते माध्यम में दिमाग को पिपेट करें। ऊतक के नकारात्मक आवेश से दिमाग को स्लाइड की सतह पर सकारात्मक आवेश का पालन करने में मदद मिलेगी।

अतिरिक्त बढ़ते माध्यम को हटा दें एंटीनाल लोब्स के साथ एक ग्रिड पैटर्न में स्लाइड पर दिमाग की सटीक स्थिति के लिए अनुमति देने के लिए, फिर दिमाग को कवर करने के लिए एक तिहाई कवर स्लिप का पालन करके दो कवर स्लिप को पुल करें।

गुहा को भरने के लिए, एक समय में बढ़ते मध्यम एक बूंद को गुहा के किनारे में रखें, और इसे केशिका गति द्वारा फैलने दें ताकि यह दिमाग को परेशान करे।

नेल पॉलिश के साथ गुहा सील, और दाग ऊतकों की फ्लोरेसेंस को संरक्षित करने के लिए अंधेरे में नकारात्मक 20 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।

उदाहरण प्रोटोकॉल में, हम इम्यूनोडांडा न्यूरॉन्स के कॉन्फोकल इमेजिंग के लिए ड्रोसोफिला दिमाग माउंट करेंगे।

- दिमाग को माउंट करने के लिए, एक पुल स्लाइड बनाएं। स्थिति दो बेस कवर सकारात्मक चार्ज स्लाइड पर लगभग एक सेंटीमीटर के अलावा फिसल जाता है। निश्चित रूप से चार्ज किए गए पक्ष का सामना करना पड़ता है। फिर नाखूनों की पॉलिश के साथ स्लाइड करने के लिए कवर स्लिप का पालन करें, और आगे बढ़ने से पहले पॉलिश को पूरी तरह से सूखने दें।

इसके बाद, स्लाइड को एक स्टीरियो माइक्रोस्कोप और पिपेट दिमाग को कवर स्लिप के बीच की जगह में मध्यम में रखें। दिमाग के दृश्य को बेहतर बनाने के लिए प्रकाश को समायोजित करना सुनिश्चित करें।

इसके बाद, अतिरिक्त बढ़ते मीडिया को स्लाइड से हटा दें, दिमाग से बचने के लिए सावधान रहें। फिर, अतिरिक्त बढ़ते मीडिया को दूर करें। यह दिमाग को अधिक सटीक रूप से तैनात करने की अनुमति देगा । अब, संदंश का उपयोग कर, एक ग्रिड पैटर्न में दिमाग उन्मुख अपने एंटीनाल lobes के साथ सामने आ रहा है

फिर, दिमाग के ऊपर एक कवर स्लिप रखें, और बेस कवर स्लिप से जुड़े शीर्ष कवर स्लिप के किनारों को सील करने के लिए नाखूनों की पॉलिश का उपयोग करें।

अब, ताजा बढ़ते मीडिया ड्रॉप वार के साथ केंद्र गुहा लोड, मीडिया केशिका कार्रवाई द्वारा कवर पर्ची के तहत तैयार करने की अनुमतिजब गुहा भर जाता है, यह पूरी तरह से स्पष्ट नाखूनों पॉलिश का उपयोग कर में सील

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