Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- בשקופית מיקרוסקופ טעונה באופן חיובי, לדבוק שתי תלושי כיסוי עם מספיק מרחק ביניהם כדי ליצור מרחב עבור המוח Drosophila להיות מותקן.
הסר מדיום הרכבה עודף כדי לאפשר מיקום מדויק של המוח בשקופית בתבנית רשת כאשר אונות האנטנה פונות כלפי מעלה, ולאחר מכן גשר בין שתי החלקות הכיסוי על-ידי דבקות בכיסוי שלישי כדי לכסות את המוח.
כדי למלא את החלל, מניחים הרכבה בינונית טיפה אחת בכל פעם לתוך קצה החלל, ולאפשר לו להתפשט על ידי תנועה נימי, כך שזה לא להפריע למוח.
לאטום את החלל עם לק, ולאחסן ב שלילי 20 מעלות צלזיוס בחושך כדי לשמר את הפלואורסצנטיות של רקמות מוכתמות.
בפרוטוקול הדוגמה, אנו נעלה מוחות Drosophila להדמיה confocal של נוירונים immunostained.
- כדי להרכיב את המוח, לבנות שקופית גשר.
לאחר מכן, הנח את השקופית תחת מיקרוסקופ סטריאו ומוחות פיפטה בטווח הבינוני אל החלל שבין החלקות המכסה.
לאחר מכן, שאפו את אמצעי ההרכבה הנוסף מהשקופית, תוך הקפדה על הימנעות מהמוח.
לאחר מכן, הניחו כיסוי על המוח, והשתמשו בלק ציפורניים כדי לאטום את קצות החלק העליון של הכיסוי המחובר לכיסוי הבסיס.
עכשיו, לטעון את החלל המרכזי עם מדיה הרכבה טריים טיפה חכם, המאפשר את התקשורת להימשך מתחת להחליק הכיסוי על ידי פעולה נימי. כאשר החלל מתמלא, לאטום אותו לחלוטין באמצעות לק ציפורניים ברור.
