Sıcaklık Gradyan Testi: Drosophila Larvalarında Sıcaklık Tercihini Test Etmek İçin Bir Yöntem

- Drosophila larvalarının sıcaklık tercihini test etmek için, bir alüminyum test plakasının bir tarafını ısıtıp diğerini soğutarak bir sıcaklık gradyanı oluşturun. Alüminyum, yüksek ısı iletkenliğine sahiptir, yani ısı verimli bir şekilde aktarılır, kararlı bir doğrusal sıcaklık gradyanı oluşturur. Sistem dengelendikten sonra, aynı büyüklükteki sıcaklık bölgelerinde plaka boyunca sıcaklıkları kaydedin, ardından plakanın merkezini temiz larvalarla yükleyin.

Parlak ışıktan paraziti ortadan kaldırmak ve denemeyi başlatmak için tüm sistemi örtün. Larvalar, çok sıcak veya çok soğuk olan aversif bölgelerden kaçınarak gradyan yoluyla dağılır ve uygun sıcaklık bölgelerine yerleşir. Bu davranışa termotaksi denir. Larvaların sıcaklık tercihini değerlendirmek için, her sıcaklık bölgesindeki hayvan sayısını kaydedin.

Örnek protokolde, 18 ila 28 santigrat derece arasında tek yönlü bir sıcaklık gradyanı nasıl kurulacağını ve larvaların test sırasında nasıl ele alındığını göreceğiz.

- Tek yönlü bir degrade hazırlamak için öncelikle test için nemli bir ortam ortamı oluşturun. Ayrı su banyolarına bağlı iki alüminyum bloğu 10 santimetre arayla ıslak kağıt havlulara yerleştirin. Su banyolarının önceden ısıtılması gerekir. Daha sonra% 1 agarose 100 mililitre yapın ve seviyeli bir yüzeydeki her test plakasına 25 mililitre ekleyin. Agarose katılaştıktan sonra, yüzeyi hafifçe kaba hale getirmek için yüzeyi bir melamin süngeri ile hafifçe ovalayın.

Daha sonra, verimli sıcaklık transferini teşvik etmek için, test plakalarındaki alüminyum bloklar arasındaki boşlukları bir sprey şişesinden verilen suyla doldurun. Şimdi, test plakalarını alüminyum blokların üzerine yerleştirin ve sınırlayıcıların alüminyum blokların kenarlarıyla tam olarak eşleşmesi için her iki kenardan 2 santimetre olduğundan emin olun.

Daha sonra, jellerin kurumasın diye plakaların yüzeyine bir su filmi püskürtün. Daha sonra, buharlaşmayı azaltmak ve jel yüzeyinin sıcaklığını stabilize etmeye yardımcı olmak için sistemi bir karton kutu ile örtün. Sıcaklığın eşitlenmesi için 5 ila 10 dakika bekleyin. Ardından, plakadaki yüzey sıcaklığını en az 12 yerde kontrol edin ve 2 santigrat derece boyunca eşit bir sıcaklık olduğundan emin olun.

İlk olarak, mukavva kutusunu jelin üzerine çıkarın ve jel yüzey sıcaklığını hızlı bir şekilde kontrol edin. Yüzey kuruysa, yüzeye az miktarda su püskürtün. Jel iyiyse, küçük bir boya fırçası kullanarak her plakanın ortasına 100 ila 200 larva yükleyin.

10 ila 30 dakika sonra, karton kutuyu ve mikro plaka kapağını çıkarın. Daha sonra larvaların konumunu kaydetmek için plakaları yukarıdan fotoğraflayın. Jelin yüzeyine yansımayı önlemek için kutuyu kameranın üzerine yerleştirin. Plakayı temizlemek için, dağınık olabilecekleri her yerde tüm larvaları aspire edin.

Şimdi, görüntü analiz yazılımını kullanarak her bölgedeki larvaların yüzde dağılımını hesaplayın.

- Sayarken, her kenardan 0,5 santimetre uzaklıktaki bölgelerde dağıtılan larvaları göz ardı edin. Jel kalınlığı ve sıcaklık koşulları kenara yakın düzgün değildir.