Encyclopedia of Experiments: Biology
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- शुरू करने के लिए, धीरे से कुछ भ्रूण को एक पेट्री डिश में स्थानांतरित करें जिसमें भ्रूण माध्यम होता है। अब कोरियो को संदंश के साथ पकड़ें और दूसरे संदंश के साथ उसमें आंसू डालें।
इसके बाद, धीरे-धीरे भ्रूण को आंसू के माध्यम से धक्का दें। भ्रूण से कोछन को हटाने से उसके विकास और आंदोलन में तेजी आती है। मलबे से छुटकारा पाने के लिए, भ्रूण को एक पाश्चुर पिपेट का उपयोग करके भ्रूण माध्यम युक्त एक और पेट्री डिश में स्थानांतरित करें।
पेट्री डिश को इनक्यूबेटर में रखें और भ्रूण को 28 डिग्री सेल्सियस की तरह बढ़ने दें। लार्वा व्यवहार में किसी भी तापमान से संबंधित विचलन से बचने के लिए प्रयोग से पहले एक प्रबुद्ध पानी से भरे माइक्रोस्कोप चरण को 28 डिग्री सेल्सियस तक सेट करें।
पेट्री डिश को स्टेज पर रखें और डिश के ऊपर कैमरे में माउंट करें। इसके बाद, भ्रूण को कैमरे के क्षेत्र में सेंटर करें। अब धीरे-धीरे भ्रूण को कुंद सुई से टच करें और वीडियो कैमरा रिकॉर्डिंग सॉफ्टवेयर पर लार्वा रिस्पॉन्स रिकॉर्ड करें।
उत्तेजना पर, भ्रूण एक शक्तिशाली भागने की प्रतिक्रिया प्रदर्शित करता है- तेज मोड़ों के साथ एक फट तैरना। इसके भागने के दौरान स्पर्श और लार्वा के चरम त्वरण के बीच के समय को मापें।
उदाहरण प्रोटोकॉल में, हम बाहरी उत्तेजनाओं के लिए जेब्राफिश लार्वा की प्रतिक्रिया का पालन करेंगे।
- परख करने के लिए, एक प्रबुद्ध तापमान नियंत्रित चरण पर लगभग 25 मिलीलीटर भ्रूण माध्यम से भरा एक पेट्री डिश रखें जो लगभग 28 डिग्री सेल्सियस तक सेट किया गया है। डिश के ऊपर हाई स्पीड कैमरा माउंट करें। वीडियो रिकॉर्डिंग सॉफ्टवेयर लॉन्च करें, और कैप्चर स्पीड को 1,000 फ्रेम प्रति सेकंड सेट करें ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि तेज तैराकी गति को कैप्चर किया जा सकता है।
भ्रूण को पेट्री डिश के केंद्र में रखें, जो देखने के क्षेत्र में स्पष्ट रूप से दिखाई देता है। प्रेस रिकॉर्ड और फिर सिर के ऊपर एक कुंद सुई के साथ भ्रूण को धीरे से छूकर एक यंत्रोसेंसिव उत्तेजना प्रदान करें।
रिकॉर्डिंग बंद करो एक बार भ्रूण देखने के क्षेत्र से बाहर तैरा है या आराम करने के लिए लौट आए ।
- एक ही लार्वा के बार-बार परीक्षण से कुछ रोग मॉडलों में आदत या मांसपेशियों की कमजोरी को बढ़ावा मिल सकता है, जिसके परिणामस्वरूप स्पर्श उत्तेजना की प्रतिक्रिया कम हो सकती है। इसलिए, प्रत्येक भ्रूण का केवल एक बार परीक्षण किया जाना चाहिए।
