Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- نقل سمكة تخدير ثلاثية على إسفنجة مبللة مع الجانب الظهري المواجه لأعلى. ضع الإسفنج الذي يحمل السمك تحت المجهر. ضع إبرة حقن صغيرة بزاوية 45 درجة من محور الجسم بالقرب من العضلة الظهرية.
بعد ذلك ، حدد موقع البقعة أمام الزعنفة الظهرية التي لا تغطيها المقاييس حيث يمكنك إدخال الإبرة دون تطبيق قوة كبيرة.
إذا كان مركب الفائدة يحتوي على مواد وراثية، كهربية الخلايا عن طريق وضع أقطاب كهربائية على جانبي موقع الحقن وإعطاء التيار.
للحفاظ على الأسماك في وضع ثابت أثناء الحقن، استخدم قطعة من الإسفنج مع قطع الأخدود في الوسط كحشوة. نقع الإسفنج جيدا في مياه النظام وتعيينها في طبق بيتري. باستخدام ملعقة بلاستيكية، ونقل حمار وحشي مخدر إلى الإسفنج الرطب مع الجانب البطني للأسماك إلى أسفل في الأخدود.
إذا شعر أي مقاومة، حاول بقعة مجاورة. استخدم مفتاح القدم لحقن محلول البلازميد تدريجيا في العضلات.
Electroporate الأسماك مباشرة بعد الحقن عن طريق وضع أقطاب نوع ملاقط في كل جانب من موقع الحقن. اضغط على زر البدء على الكهربائي وإعطائها ستة 40 فولت، 50 مللي ثانية البقول. ثم نقل بلطف الأسماك إلى خزان الانتعاش. وأخيرا، بعد تخدير الأسماك وفقا لبروتوكول النص، واستخدام ضوء الأشعة فوق البنفسجية لرؤية التعبير EGFP بالقرب من موقع الحقن.
