Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Transferir un pez anestesiado de tricarina sobre una esponja húmeda con el lado dorsal hacia arriba. Coloque la esponja que transporta el pez bajo un microscopio.
A continuación, localice el punto delante de la aleta dorsal que no está cubierta con escamas donde se puede insertar la aguja sin aplicar gran fuerza.
Si el compuesto de interés contiene material genético, electroporate las células colocando electrodos a ambos lados del lugar de inyección y administrando la corriente. La corriente hace que las células musculares sean permeables y capaces de tomar eficientemente el material genético.
Para mantener el pescado en una posición fija durante la inyección, utilice un trozo de esponja con una ranura cortada en el medio como acolchado. Remoje bien la esponja en el agua del sistema y colóquela en una placa de Petri. Usando una cuchara de plástico, transfiera un pez cebra anestesiado a la esponja húmeda con el lado ventral del pez hacia abajo en la ranura. Bajo el microscopio, coloca la aguja en un ángulo de 45 grados cerca del músculo dorsal del pez cebra.
Si se siente alguna resistencia, pruebe un punto adyacente. Utilice un interruptor de pie para inyectar gradualmente la solución plásmida en el músculo. Bajo el microscopio, el fenol rojo debe ser visible a medida que entra en el tejido muscular.
Electroporate el pez inmediatamente después de la inyección colocando los electrodos de tipo pinza a cada lado del lugar de inyección. Pulse el botón Inicio del electroporador y dale seis pulsos de 40 voltios y 50 milisegundos.
