Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Перенесите трикаин под наркозом рыбу на влажную губку с спинной стороной лицом вверх. Поместите губку, несущую рыбу под микроскопом. Положение микро-инъекционной иглы под углом 45 градусов от оси тела вблизи спинной мышцы.
Далее, найти место перед спинной плавник, который не покрыт чешуей, где вы можете вставить иглу без применения большой силы. Затем осторожно вставить иглу и медленно вводить соединение интереса вместе с маркером, таким как фенол красный в мышцу.
Если соединение интереса содержит генетический материал, электропорат клетки путем размещения электродов по обе стороны от места инъекции и введения тока. Ток делает мышечные клетки проницаемыми и в состоянии эффективно взять генетический материал. После процедуры, немедленно передать рыбу в бак восстановления. В следующем протоколе, мы будем выполнять внутримышечные инъекции на взрослой зебры, чтобы доставить вакцину ДНК против микобактерий.
Чтобы держать рыбу в фиксированном положении во время инъекции, используйте кусок губки с пазом вырезать в середине, как обивка. Замочите губку тщательно в системной воде и установите его в чашку Петри. Использование пластиковой ложкой, передача анестезированной зебры к мокрой губке с вентраальной стороны рыбы вниз в паз. Под микроскопом, поместите иглу под углом 45 градусов близко к спинной мышце зебры.
Если какая-либо устойчивость ощущается, попробуйте смежные пятна. Используйте переключатель ноги, чтобы постепенно вводить плазмидный раствор в мышцу. Под микроскопом, фенол красный должен быть виден, как он входит в мышечную ткань.
Электропорат рыбы сразу после инъекции путем размещения электродов типа пинцета с каждой стороны места инъекции. Нажмите кнопку Пуск на электропоратор и дайте ему шесть 40 вольт, 50 миллисекундных импульсов. Затем аккуратно перенесите рыбу в резервуар для восстановления.
