筋肉内(IM)注射:成体ゼブラフィッシュの後筋への化合物送達

- トリケーヌ麻酔魚を背側を上に向けた濡れたスポンジに移す。顕微鏡の下に魚を運ぶスポンジを置く。背側筋の近くの体軸から45度の角度でマイクロ注射針を置く。

次に、大きな力を加えずに針を挿入できる鱗で覆われない背びれの前の場所を見つけます。

目的の化合物に遺伝物質が含まれている場合は、注射部位の両側に電極を配置して電流を投与することによって細胞を電気ポポレートします。電流は筋肉細胞を透過性にし、遺伝物質を効率的に取り込むことができる。

注射中に魚を固定位置に保つには、パッドとして中央に切られた溝を持つスポンジを使用してください。 スポンジをシステムの水に十分に浸し、ペトリ皿にセットします。プラスチックスプーンを使って、魚の腹側を溝に下にして麻酔したゼブラフィッシュを濡れたスポンジに移します。

もし抵抗が感じられるなら、隣接するスポットを試してみなさい。足スイッチを使って徐々にプラスミド溶液を筋肉に注入しなさい。顕微鏡の下では、フェノールの赤が筋肉組織に入ると見えるはずです。

注入部位の両側にトゥイザータイプの電極を配置して注入直後に魚を電気ポポレートし、エレクトロポレーターのスタートボタンを押して6つの40ボルト、50ミリ秒のパルスを与え、回復タンクに魚を静かに移します。