Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Übertragen Sie einen triainen beästheten Fisch auf einen nassen Schwamm mit der Rückenseite nach oben. Platzieren Sie den Schwamm, der den Fisch unter dem Mikroskop trägt. Positionieren Sie eine Mikro-Injektionsnadel in einem 45-Grad-Winkel von der Körperachse in der Nähe des Rückenmuskels.
Als nächstes, lokalisieren Sie die Stelle vor der Rückenflosse, die nicht mit Schuppen bedeckt ist, wo Sie die Nadel einsetzen können, ohne große Kraft. Dann legen Sie vorsichtig die Nadel und langsam injizieren Sie die Verbindung von Interesse zusammen mit einem Marker wie Phenol rot in den Muskel.
Wenn die Verbindung von Interesse genetisches Material enthält, elektroporate die Zellen, indem elektroporate die Zellen durch die Platzierung von Elektroden auf beiden Seiten der Injektionsstelle und die Verabreichung des Stroms. Der Strom macht die Muskelzellen durchlässig und in der Lage, effizient das genetische Material aufzunehmen. Nach dem Eingriff, übertragen Sie die Fische sofort in einen Erholungsbehälter. Im folgenden Protokoll führen wir eine intramuskuläre Injektion an einen erwachsenen Zebrafisch durch, um einen DNA-Impfstoff gegen Mykokokeriose zu liefern.
Um den Fisch während der Injektion in einer festen Position zu halten, verwenden Sie ein Stück Schwamm mit einer Nut in der Mitte als Polsterung. Den Schwamm gründlich in Systemwasser einweichen und in eine Petrischale stellen. Mit einem Plastiklöffel einen beseeten Zebrafisch mit der ventralen Seite des Fisches in der Nut in den nassen Schwamm geben. Unter dem Mikroskop die Nadel in einem 45-Grad-Winkel in der Nähe des Rückenmuskels des Zebrafischs platzieren.
Wenn ein Widerstand gefühlt wird, versuchen Sie es mit einem angrenzenden Punkt. Verwenden Sie einen Fußschalter, um die Plasmidlösung nach und nach in den Muskel zu injizieren. Unter dem Mikroskop sollte das Phenolrot sichtbar sein, wenn es in das Muskelgewebe eindringt.
Elektroporate den Fisch sofort nach der Injektion, indem Sie die Pinzette-Typ Elektroden an jeder Seite der Injektionsstelle. Drücken Sie die Start-Taste auf dem Elektroporator und geben Sie ihm sechs 40 Volt, 50 Millisekunden Impulse. Dann übertragen Sie den Fisch sanft in einen Erholungsbehälter. Schließlich, nach der Anästhesisierung der Fische nach dem Textprotokoll, verwenden Sie ein UV-Licht, um EGFP-Expression in der Nähe der Injektionsstelle zu sehen.
