Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Överför en trikainestesiiserad fisk på en våt svamp med dorsalsidan vänd uppåt.
Lokalisera sedan platsen framför dorsalfenan som inte är täckt med vågar där du kan sätta in nålen utan att applicera stor kraft.
Om intresseföreningen innehåller genetiskt material, elektroporera cellerna genom att placera elektroder på vardera sidan av injektionsstället och administrera strömmen. Strömmen gör muskelcellerna genomsläppliga och kan effektivt ta upp det genetiska materialet.
För att hålla fisken i ett fast läge under injektionen, använd en bit svamp med ett spår som skärs i mitten som stoppning. Blötlägg svampen noggrant i systemvatten och ställ in den i en petriskål. Med hjälp av en plastsked, överför en bedövad zebrafisk till den våta svampen med fiskens ventrala sida ner i spåret. Under mikroskopet placerar du nålen i 45 graders vinkel nära zebrafiskens dorsala muskel.
Om något motstånd känns, prova en intilliggande fläck. Använd en fotbrytare för att gradvis injicera plasmidlösningen i muskeln.
Elektroporera fisken omedelbart efter injektionen genom att placera pincetttypelektroder på varje sida av injektionsstället. Tryck sedan på startknappen på elektroporatorn och ge den sex 40 volt, 50 millisekunders pulser. Överför sedan försiktigt fisken till en återvinningstank.
