Journal
/
/
En protokoll for funksjonell vurdering av Whole-Protein metning Mutagenese Biblioteker Utnytte høy gjennomstrømming sekvense
JoVE Journal
Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Journal Biology
A Protocol for Functional Assessment of Whole-Protein Saturation Mutagenesis Libraries Utilizing High-Throughput Sequencing
DOI:

11:36 min

July 03, 2016

, , ,

Chapters

  • 00:05Title
  • 00:43Synthesis of NNS Sub-libraries for Each Amino Acid Position by Two-step PCR Site-directed Mutagenesis
  • 01:53Cloning of NNS Sub-libraries into Selection Vectors
  • 03:47Selection of the TEM-1 Whole-Protein Saturation Mutagenesis Library for Antibiotic Resistance
  • 05:51High Throughput Sequencing to Determine Fitness Effects of Mutations
  • 08:44Results: High Throughput Sequencing from Whole-Protein Saturation Mutagenesis
  • 10:16Conclusion

Summary

Automatic Translation

Vi presenterer en protokoll for funksjonell vurdering av omfattende single-site metning mutagenese biblioteker av proteiner utnytte high-throughput sekvensering. Viktigere, bruker denne tilnærmingen ortogonale primerpar å multiplekse bibliotek konstruksjon og sekvensering. Representative resultater ved hjelp av TEM-1 β-laktamase valgt på en klinisk relevant dosering av ampicillin er gitt.

Related Videos

Read Article