Immunology and Infection
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Een Muriene model van dengue virus-geïnduceerde acute virale encefalitis-achtige ziekte
Chapters
Summary April 28th, 2019
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Hier presenteren we een protocol voor het creëren van een immunocompetente ICR (Institute of Cancer Research) Murine model van infectie van het centrale zenuwstelsel om de ontwikkeling van neuropathie weer te geven. Monitoring van acute virale encefalitische stoornissen door identieke ziekte scores kan worden uitgevoerd voor het tonen van Denguevirus-geïnduceerde neuropathie in vivo.
Transcript
Dit protocol van een ziektemodel zie je dengue virus infectie in de hersenen uitgegroeid tot een in vivo platform voor screening virale en gastheer vectoren geassocieerd met neuropathogenese. In tegenstelling tot eerdere modellen, onze modellen gebruiken instrumenten van de infectie met een lage virale titer, om het immunocompetent Instituut voor Kanker Onderzoek zogende muizen te infecteren voor encefalotische-achtige ziekte voortplanting inductie. Het aantonen van de procedure zal Ting-Jing Shen, een promovendus uit mijn laboratorium.
Verdun voor het initiëren van de infectieprocedure het niet-aangepaste denguevirus twee bestands, tot een één keer 10 tot de vijfde plaquevormende eenheden per 40 microliter van RPMI 1640 gemiddelde concentratie. Laad vervolgens een spuit van 0,3 milliliter uitgerust met een naald van 30 meter met 10 microliter verdund virus. En een 0,3 milliliter spuit uitgerust met een 30-meter naald, met 30 microliter virus per dier.
Voor intercerebrale levering van het virus, druk op het orakel tussen de duim en wijsvinger om voorzichtig te beperken een zeven dagen oude zogende Institute of Cancer Research muis in een gevoelige positie en injecteren van de 10 microliter volume van verdund virus in de lambda gebied, op het kruispunt van de sagittale en lambdoïde suture. Na de intercerebrale injectie, gebruik de duim en wijsvinger om de muis in een supinepositie te houden, en voorzichtig intraperitoneally, het volume van 30 microliter van verdund virus, in de murinebuik te injecteren. Voor het scoren van de progressie van de ziekte, toewijzen van een score van nul tot vijf aan elke ingeënte muis dagelijks, volgens de rang van acute virale encefalitis-achtige ziekten, en plot de scores voor elke dag als een curve gebaseerde figuur, met behulp van de gemiddelde plus en min de standaard afwijking van de dagelijkse test scores in elke groep.
Vergeleken met de veranderingen in het lichaamsgewicht gemeten in mock, medium alleen ingeënt muizen, dengue virus ingeënt dieren vertonen een daling van het lichaamsgewicht op elk moment tijdens de proef. Bovendien, dengue virus besmette dieren tonen een aanzienlijke toename van voorgevoel rughoudingen, limbische aanvallen, limbische zwakte, verlamming, en de dood in vergelijking met de symptomen weergegeven door mock ingeënte dieren. Dengue geïnfecteerde muizen vertonen namelijk een tijdsafhankelijke vermindering van de overlevingskansen die niet wordt waargenomen bij nepgeïnculeerde dieren, wat de oprichting van een besmettelijk model van denguevirus in het centrale zenuwstelsel bevestigt dat de progressie van acute virale encefalitis-achtige ziekten bij muizen aantoont.
Punctie van de verkeerde plaats kan leiden tot naaldverstopping door de score en de overloop van de virusoplossing buiten het hoofd, wat resulteert in een mislukte injectie en een mislukte infectie. Na de procedure, hersenmonsters kunnen worden geoogst voor pathologische schade, immuuncel infiltratie, en virale replicatie analyse door hematoxylin en eosine kleuring stroom cytometrie, en plaque vorming test, respectievelijk. Ons immunocompetent murinemodel biedt een platform voor het verkennen van de pathogene mechanismen van denguevirusinfectie, voor de ontwikkeling van denguevirusvaccins of anti-denguevirusmedicijnen.
Dengue virus is een bioveiligheid niveau twee ziekteverwekker, en als zodanig, alle experimenteren met dit virus moet worden voltooid in een gekwalificeerde dier bioveiligheid niveau twee laboratorium.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
