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एंटीबायोटिक-इलाज मच्छरों के साथ एक बैक्टीरियल ओरल फीडिंग परख
Chapters
Summary September 12th, 2020
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यह लेख व्यक्तिगत मच्छर आंत बैक्टीरिया के प्रभाव की जांच करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करता है, जिसमें अलगाव और मच्छर मिडगट कृषि योग्य रोगाणुओं की पहचान, मच्छर आंत बैक्टीरिया की एंटीबायोटिक कमी, और एक विशिष्ट बैक्टीरिया प्रजातियों को फिर से पेश करना शामिल है।
Transcript
मच्छर मिडगुट रोगाणुओं के एक जटिल समुदाय को बंदरगाहों करता है जो मेजबान चयापचय, प्रजनन, फिटनेस और पशु चिकित्सक क्षमता को प्रभावित करते हैं। प्रत्येक आंत माइक्रोब के साथ एक अलग प्रभाव है। यह वीडियो प्रत्येक बैक्टीरिया तनाव या मेजबान शरीर विज्ञान की संबंधित भूमिका का अध्ययन करने की प्रक्रिया का परिचय देता है।
आंत जीवाणु कालोनियों की संस्कृति प्राप्त करने के लिए, बाँझ स्थिति के तहत मच्छर मिडगुट को काटना। विच्छेदन मिडगुट, सेरोटोलोजिनेट को जमीन पर रखें, और आगर प्लेट पर फैल गए। प्लेट से एकल कालोनियों उठाओ, और उनके 16 SRNA जीन अनुक्रम के माध्यम से बैक्टीरिया प्रजातियों की पहचान ।
आंत माइक्रोबायोटा को हटाने के लिए लगातार तीन दिनों तक एंटीबायोटिक युक्त कॉड एम्बोस के साथ मच्छरों को खिलाएं। एंटीबायोटिक उपचार की प्रभावशीलता की पुष्टि बाद के चरमपंथियों से पहले इकाई परख बनाने वाली कॉलोनी के लिए एसेप्टिक मच्छर के मिडगट को विच्छेदन करके की जा सकती है। फिर मौखिक भोजन परख के माध्यम से मच्छर आंत से अलग विशिष्ट बैक्टीरिया प्रजातियों को फिर से पेश करें।
अनुपचारित मच्छरों, एंटीबायोटिक-इलाज मच्छरों की तुलना करके मेजबान शरीर विज्ञान पर बैक्टीरिया के प्रभाव का मूल्यांकन किया जा सकता है, और मच्छरों ने विशिष्ट संयम को फिर से शुरू किया। मिडगुट विच्छेदन और खेती करने योग्य बैक्टीरिया अलगाव। शुरू करने के लिए, पिंजरे में मच्छरों को एक एस्पिरेटर के साथ इकट्ठा करें और संग्रह बॉक्स में मच्छरों को सेल करें।
मच्छरों को तीन से पांच मिनट तक 4 डिग्री तापमान के अधीन करके एनेस्थेटाइज करें। मच्छरों को आइस कोल्ड पेट्री डिश में रखकर एनेस्थेटाइज रखें। बेंच को कीटाणुरहित करें, माइक्रोस्कोप को विच्छेदन करें, और पर्यावरण से बैक्टीरिया द्वारा संदूषण से बचने के लिए 75% इथेनॉल छिड़ककर संदंश करें।
सतह मच्छर को टेप करके और उन्हें तीन मिनट के लिए 75% इथेनॉल में हिलाकर और पीबीएस बफर के साथ दो बार कुल्ला करके स्टरलाइज करें। पीबीएस की अपनी बूंद युक्त बाँझ ग्लास स्लाइड पर मच्छर को अलग से विभाजित करें। संदंश का उपयोग करके मच्छर के पैरों, पंखों और सिर को सावधानी से हटा दें।
मच्छर की छाती और पेट के अंतिम भाग को दबाना और पाचन तंत्र को अलग करने के लिए अलग खींचना था। पाचन तंत्र से फसल और मालपिगियन ट्यूब को हटाने के लिए संदंश का प्रयोग करें। फसल चीनी पानी निगलने के बाद मिडगट और उभार के pnterior पर तैनात है।
माल्पिगियन ट्यूब मिडगुट और हिंडगट के जंक्शन पर पतली उत्सर्जित ट्यूबों का समूह है। 200 माइक्रोलीटर बाँझ पीबीएस बफर के साथ ईपी ट्यूब में विच्छेदित मेकअप रखें और इसे साफ बेंच में बाँझ पीसने वाले पादरी के साथ पीसें। अनाज पौंड आगर प्लेट और हताश थाली के लिए प्रत्येक भ्रम के ५० माइक्रोलीटर पर तीन गति भ्रम के लिए समरूप लोड करने के लिए ।
एक से दो दिनों के लिए 37 डिग्री के रूप में थाली इनक्यूबेट जब तक एकल कालोनियों संभव हैं। 50 मिलीलीटर पौंड ब्रा माध्यम से युक्त 150 मिलीलीटर शंकु फ्लास्क में एकल कालोनियों को चुनें। बैक्टीरिया को रात भर 37 डिग्री पर हिलाएं।
प्रजातियों की पहचान। बैक्टीरियल जीनोमिक डीएनए निर्माण किट द्वारा टोटो डीएनए निकालें और पीसीआर द्वारा 16 एसआरडीएनए को बढ़ाना। वसूली और एम्ब्रोस जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस और चलाई वसूली किट द्वारा पीसीआर उत्पादों से डीएनए के टुकड़ों की शुद्धि ।
शुद्ध डीएनए टुकड़ों पर डीएनए अनुक्रमण प्रदर्शन करने के लिए एक प्राप्त बैक्टीरिया श्रृंखला दृश्यों है । एक क्वेरी के लिए ब्लास्ट खोज चलाएं बैक्टीरिया और आर्किया और डेटाबेस के खिलाफ बैक्टीरिया की पहचान करने के 16 एसआरएनए जीन अनुक्रम। प्रजातियों के स्तर के लिए पहचान से अधिक या निकटतम टीम बैंक प्रवेश के लिए ९९% 16 SRDNA अनुक्रम समानता के बराबर के रूप में परिभाषित किया गया था ।
अलग यह इसी को सौंपा गया था, जीनस जब 16 SRDNA अनुक्रम है, समानता से कम ९९% और अधिक से अधिक या ९५% एंटीबायोटिक उपचार और जीवाणु फिर से परिचय के बराबर था । हमें 10% सुक्रोज समाधान तैयार करने के लिए सुक्रोज पेनिसिलिन और स्ट्रेप्टोमाइसिन की आवश्यक मात्रा का वजन करें, जिसमें पेनिसिलिन की 20 इकाइयों और 20 माइक्रोग्राम स्ट्रेप्टोमाइसिन प्रति मिलीलीटर शामिल है। एंटीबायोटिक युक्त सुक्रोज समाधान में कपास गेंदों में घुसपैठ करें और इसे मच्छर युक्त पेपर कप के शीर्ष पर रखें।
वाष्पीकरण से एक तट को रोकने के लिए एक 10 सेंटीमीटर पेट्री डिश के साथ कपास की गेंद को कवर करें। कॉटन बॉल्स को दो बार दिन में बदलें और लगातार तीन दिन तक मच्छर को खिलाएं। मच्छरों को दो समूहों में बांटा गया है।
पहले समूह को बिना किसी उपचार के मच्छर कप में रखा गया था, 10% के साथ किसी भी कपास गेंदों डॉक्टर को दैनिक दिया गया था। दूसरे ग्रुप में एंटीबायोटिक दवाओं से इलाज किया गया और तीन दिन तक सेवा दी गई । प्रत्येक समूह में, सर्गेई मच्छरों का विच्छेदन किया गया था।
मिका कुल डीएनए निष्कर्षण के लिए निकाला गया था और QPCR सार्वभौमिक बैक्टीरिया प्राइमर का उपयोग कर प्रदर्शन किया गया था, आंकड़ा एक नियंत्रण समूह और एंटीबायोटिक उपचार समूह में 16 SRNA की अभिव्यक्ति से पता चलता है । परिणाम बताते हैं कि पेनिसिलिन और स्ट्रेप्टोमाइसिन की लागत या प्राप्ति सफल रही। बैक्टीरियल समाधान तैयार करें, स्पेक्ट्रोफोटोमीटर के साथ वायरस में बैक्टीरिया के समाधान को मापते हैं, ईपी ट्यूब में एक ओटी बैक्टीरिया निलंबन जोड़ें।
अपकेंद्रित्र चार डिग्री पर पांच मिनट के लिए 5, 000 आरसीए पर निलंबन अतिनाट त्यागें, बाँझ PBS बफर के साथ बैक्टीरिया फूस की कोशिश करता है धोने । 200 माइक्रोलीटर बाँझ पीबीएस बफर के साथ बैक्टीरियल पैलेट को फिर से निलंबित करें 600 माइक्रोलीटर, 10% सुक्रोज समाधान, 200 माइक्रोलीटर एटीपी और 200 माइक्रोलीटर बैक्टीरियल सस्पेंशन को एक नई एपी ट्यूब में जोड़ें और अच्छी तरह से मिलाएं। वैकल्पिक रूप से, बैक्टीरिया को आपके रक्त को सक्रिय करने में गर्मी में फिर से निलंबित किया जा सकता है।
सक्रिय रक्त को गर्म करने की तैयारी। एंटीकोगुलैंट ट्यूब के साथ ताजा रक्त का थक्का, ताजा रक्त के दो से तीन मिलीलीटर लें। प्लाज्मा और रक्त कोशिकाओं को अलग करने के लिए चार डिग्री पर 10 मिनट के लिए 1000 पर अपकेंद्रित्र।
प्लाज्मा को एक नई ईपी ट्यूब में ले जाएं और इसके साथ ही एक घंटे के लिए 56 डिग्री पर सक्रिय हो जाएं। बाँझ PBS बफर के साथ अपने समय के माध्यम से ब्लास्ट हाउस धोएं। हीटिंग सक्रिय प्लाज्मा के साथ निलंबित विस्फोट घर कुल्ला।
झिल्ली और भोजन प्रणाली को इकट्ठा करें। फिल्म बीमारी को अधिकतम तक खींचें। लीक से बचने के लिए प्लास्टिक की अंगूठी और कार्यस्थल पैराफिल्म के साथ फिक्स धीरे-धीरे अधिकतम वॉलेट में फीडर यूनिट में तैयार बैक्टीरियल समाधान जोड़ें।
बुलबुला एक दिशा से गिर गया और फीडर इकाई सील से बचने के लिए। बिजली आपूर्ति को जोड़ें। तापमान 37 डिग्री तक पहुंचने तक प्रतीक्षा करें फीडर पर बैक्टीरिया समाधान के साथ फीडर इकाई स्थापित करें।
बैक्टीरिया मच्छरों को खिलाने से पहले एंटीबायोटिक दवाओं को मेटाबोलाइज करने के लिए 24 घंटे के लिए बंद कर देना चाहिए। मच्छरों के साथ पेपर कप पर फ़ीड यूनिट के लिए, फिर 90 मिनट के लिए खिलाने की अनुमति दें। पूरी तरह से प्रोत्साहित मच्छरों को आगे के अध्ययन के लिए चुना जा सकता है ।
प्रतिनिधि परिणाम। चित्रा दो हमें प्रति मच्छर औसत वाहवाही दिखाते हैं । एंटीबायोटिक की साजिश खिलाने के बाद मच्छरों का इलाज किया हम मेनिंगोसेप्टिकम देखते हैं।
चित्रा तीन सी मेनिंगोसेप्टिकम युक्त रक्त भोजन के 24 घंटे बाद एक संस्करण विकास से संबंधित जीन की अभिव्यक्ति दिखाता है । परिणाम बताते हैं कि नियंत्रण समूह और लुप्त होती समूह के अंडा उत्पादन में कोई महत्वपूर्ण परिवर्तन नहीं हुआ है। बैक्टीरिया या एंटीबायोटिक इलाज मच्छरों के साथ एक खिला निबंध में आपकी रुचि के लिए धन्यवाद।
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