بروتوكول اقتصادي وفعال لعزل وزراعة الخلايا الشجيرية المشتقة من نخاع العظم من الفئران

بروتوكول اقتصادي وفعال لعزل وتوليد الخلايا المتغصنة المشتقة من نخاع العظم من الماوس. تمت الموافقة على الإجراءات التي تنطوي على مواضيع حيوانية من قبل لجنة أخلاقيات الحيوان التابعة لجامعة نانجينغ الطبية.One.Introduction. مع الزيادة في أبحاث مناعة الورم ، يزداد الطلب على خلايا DC تدريجيا.

ومع ذلك ، فإن DCs نادرة في جميع الأنسجة. الطريقة التقليدية للحث بشكل رئيسي على تمايز نخاع العظم إلى DCs معقدة ومكلفة. اثنان. عزل نخاع العظم وإعداد الخلايا BM نحن نضحي بالفئران ونصلحها على طاولة عمليات الفئران.

قطع جلد العضلات اليسرى المكشوفة والشريان الفخذي. لا تقطع الشريان الفخذي مباشرة. خلاف ذلك ، فإنه سوف يسبب نزيفا حادا ويلوث مجال الرؤية.

قطع جميع العضلات حول عظم الفخذ. تمتد ببطء الأطراف السفلية للفأر إلى الخارج حتى هبوط رأس الفخذ ويمكن ملاحظتها. افصل الأطراف السفلية عن الجسم.

قطع الساق الخلفية للحصول على عظم الفخذ الحرة والكاملة. إزالة العضلات باستخدام الشاش. لا تمزق العضلات مباشرة.

عظم الفخذ من الفئران هشة. ضع عظم الفخذ في 75٪ من الكحول لمدة دقيقتين إلى خمس دقائق. تلاتة. ثقافة الحقن من BMDC شطف الكحول المتبقي مع PBS.

المشبك الجزء الأوسط والسفلي من عظم الفخذ مع ملقط مرقئ ، والمشبك الطرف السفلي من عظم الفخذ مع ملقط مرقئ آخر. يتم تطبيق ملقط مرقئ حرفيا على عظم الفخذ ويتم كسر عظم الفخذ من خط المشاش. استخدم حقنة مل واحدة لاختراق تجويف نخاع العظم من خط المشاش.

استخدم جزأين متوسطين كاملين لغسل تجويف نخاع العظم حتى يصبح العظم أبيض. جمع سوائل التنظيف. تكملة الوسط الكامل الذي يحتوي على GM CSF / IL-4 إلى 24 مل ، والبذور في طبق من 6 آبار مع 4 مل لكل بئر. أربعة.النتائج.

بعد يومين، استبدل جميع الوسائط التي تحتوي على GM-CSF/IL-4. واستبدل نصفها الوسيط الكامل المحتوي على GM-CSF/IL-4، في اليوم الرابع والسادس والثامن. وصل عدد الخلايا إلى ذروته في اليوم السابع ثم انخفض تدريجيا.

شكلت خلايا DC عددا كبيرا من نقاط الاشتباك العصبي التي تظهر مورفولوجيا خلايا DC ناضجة نموذجية. تظهر تحليلات المقاييس الفرعية للتدفق أن نسبة CD11c فرضت ما 71٪ في اليوم السادس ، وزيادة النسبة الواسعة إلى 96.1٪ في اليوم العاشر. زاد التعبير عن CD11c و CD80 و MSC2 تدريجيا مع زيادة وقت الزراعة. خامسا.الاستنتاج.

باختصار ، أنشأنا بروتوكولا اقتصاديا وفعالا لعزل وتوليد الخلايا المتغصنة المشتقة من نخاع العظام من الفئران ، والتي تستغرق 10 دقائق فقط لفصل خلايا نخاع العظام. تم حصاد عدد كبير من DCs عالية النقاء بعد ستة إلى سبعة أيام من الثقافة مع 10ng لكل مل ، GM-CSF ، و IL-4.