Economisch en efficiënt protocol voor het isoleren en kweken van beenmerg-afgeleide dendritische cellen van muizen

Economisch en efficiënt protocol voor het isoleren en genereren van beenmerg-afgeleide dendritische cellen van de muis. Procedures met betrekking tot dierlijke proefpersonen zijn goedgekeurd door de Instelling Animal Ethics Committee van Nanjing Medical University.One.Inleiding. Met de toename van tumorimmuniteitsonderzoek neemt de vraag naar DC-cellen geleidelijk toe.

DC’s zijn echter zeldzaam in alle weefsels. De traditionele methode om voornamelijk de differentiatie van beenmerg in DC’s te induceren, is ingewikkeld en kostbaar. Twee. Isolatie van beenmerg en voorbereiding van BM-cellen We offeren muizen op en fixeren ons op de operatietafel van de muis.

Snijd de huid van de linker blootgestelde spieren en dijbeenslagader. Snijd de dijbeenslagader niet direct door. Anders zal het zware bloedingen veroorzaken en het gezichtsveld besmetten.

Snijd alle spieren rond het dijbeen. Strek langzaam de onderste ledematen van de muis naar buiten tot verzakking van de heupkop en kan worden waargenomen. Scheid de onderste ledematen van het lichaam.

Snijd het achterbeen af om een vrij en compleet dijbeen te verkrijgen. Verwijder de spieren met behulp van gaas. Scheur de spieren niet direct.

Het dijbeen van muizen is fragiel. Plaats het dijbeen twee tot vijf minuten in 75% alcohol. Drie. Injectiecultuur van BMDC Spoel de resterende alcohol af met PBS.

Klem het middelste en onderste deel van het dijbeen vast met een hemostatische tang en klem het onderste uiteinde van het dijbeen vast met een andere hemostatische tang. De hemostatische tang wordt letterlijk op het dijbeen aangebracht en het dijbeen wordt gebroken van de epifysaire lijn. Gebruik één ml spuit om de beenmergholte van de epifysaire lijn te doorboren.

Gebruik volledig medium twee delen spoel de beenmergholte totdat het bot wit wordt. Verzamel spoelvloeistoffen. Aanvulling van het volledige medium met GM CSF /IL-4 tot 24ml, en zaad in een 6-well plaat met 4ml per put. Vier.Resultaten.

Vervang na twee dagen alle mediums die GM-CSF/IL-4 bevatten. De helft verving het volledige medium met GM-CSF/IL-4, op de vierde en zesde en achtste dag. Het aantal cellen bereikte een piek op de zevende dag en nam vervolgens geleidelijk af.

DC-cellen vormden een groot aantal synapsen die een typische volwassen DC-celmorfologie vertoonden. Flow submetrische analyses tonen aan dat de verhouding van CD11c opgelegd wat 71% op de zesde dag, brede ratio toename tot 96,1% op de 10e dag. De expressie van CD11c, CD80 en MSC2 nam geleidelijk toe met toenemende teelttijd. Vijf.Conclusie.

Kortom, we hebben een economisch en efficiënt protocol opgesteld voor het isoleren en genereren van beenmerg-afgeleide dendritische cellen van muizen, dat slechts 10 minuten nodig heeft om beenmergcellen te scheiden. Een groot aantal zeer zuivere DC’s werd geoogst na zes tot zeven dagen cultuur met 10ng per ml, GM-CSF en IL-4.