Journal
/
/
从小鼠中分离和培养骨髓衍生树突状细胞的经济有效的方案
JoVE Journal
Immunology and Infection
Author Produced
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Journal Immunology and Infection
Economical and Efficient Protocol for Isolating and Culturing Bone Marrow-derived Dendritic Cells from Mice

从小鼠中分离和培养骨髓衍生树突状细胞的经济有效的方案

7,674 Views

04:29 min

July 01, 2022

DOI:

04:29 min
July 01, 2022

53 Views
, , , , ,

Transcript

Automatically generated

从小鼠分离和生成骨髓衍生树突状细胞的经济有效的方案。涉及动物受试者的程序已获南京医科大学动物伦理委员会批准。随着肿瘤免疫研究的增加,对DC细胞的需求逐渐增加。

然而,DC在所有组织中都很少见。以骨髓分化为DC为主的传统方法复杂且成本高昂。二。骨髓的分离和BM细胞的制备 我们处死小鼠并固定在小鼠手术台上。

切除左侧暴露的肌肉和股动脉的皮肤。不要直接切除股动脉。否则,会引起大量出血并污染视野。

切除股骨周围的所有肌肉。慢慢地将小鼠的下肢向外拉伸,直到股骨头脱垂,可以观察到。将下肢与身体分开。

切开后腿以获得自由和完整的股骨。使用纱布去除肌肉。不要直接撕裂肌肉。

小鼠的股骨很脆弱。将股骨置于75%酒精中两到五分钟。三。BMDC注射培养 用PBS冲洗残留的酒精。

用止血镊子夹住股骨的中下部,用另一个止血钳夹住股骨的下端。止血钳从字面上施加到股骨上,股骨从骨骺线断裂。使用一ml注射器从骨骺线刺穿骨髓腔。

使用完整的培养基两部分冲洗骨髓腔,直到骨头变白。收集冲洗液。补充含有GM CSF / IL-4至24ml的完整培养基,并在6孔板中播种,每孔4ml。四.结果.

两天后,更换所有含有GM-CSF / IL-4的培养基。在第四天、第六天和第八天,一半人更换了含有GM-CSF / IL-4的完整培养基。细胞数量在第七天达到峰值,然后逐渐减少。

DC细胞形成大量突触,呈现典型的成熟DC细胞形态。流量子指标分析表明,CD11c在第6天施加的比率为71%,在第10天将宽比提高到96.1%。CD11c、CD80和MSC2的表达随着培养时间的增加而逐渐增加。五、结论。

简而言之,我们建立了一种经济有效的方案,用于从小鼠中分离和生成骨髓来源的树突状细胞,只需10分钟即可分离骨髓细胞。在培养6至7天后收获大量高纯度DC,每毫升10ng,GM-CSF和IL-4。

Summary

Automatically generated

在这里,我们提出了一种经济有效的方法,在用10 ng / mL GM-CSF / IL-4培养7天后从小鼠中分离和产生高纯度骨髓来源的树突状细胞。

Read Article