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CRISPR/Cas9-मध्यस्थता जीन-मैनिपुलेटेड माउस मॉडल विकसित करने के लिए भ्रूण स्टेम सेल में अत्यधिक कुशल जीन लक्ष्यीकरण
JoVE Journal
Developmental Biology
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JoVE Journal Developmental Biology
CRISPR/Cas9-Mediated Highly Efficient Gene Targeting in Embryonic Stem Cells for Developing Gene-Manipulated Mouse Models
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CRISPR/Cas9-मध्यस्थता जीन-मैनिपुलेटेड माउस मॉडल विकसित करने के लिए भ्रूण स्टेम सेल में अत्यधिक कुशल जीन लक्ष्यीकरण

DOI:
10.3791/64385-v

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10:57 min

•

August 24, 2022

•

, ,
1Laboratory of Reproductive Systems Biology, Center for Experimental Medicine and Systems Biology, The Institute of Medical Science,The University of Tokyo, 2Research Institute for Microbial Diseases,Osaka University

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 01:06Gene Targeting of Embryonic Stem Cells (ESCs)
  • 04:16PCR Genotyping of Targeted ESCs
  • 07:02Preparation of Eight-Cell Stage Embryo and Microinjection of ESCs
  • 09:49Results: Screening of Targeted ESC Clones
  • 10:10Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

यहां हम भ्रूण स्टेम कोशिकाओं का उपयोग करके आनुवंशिक रूप से संशोधित माउस मॉडल विकसित करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं, खासकर बड़े डीएनए नॉक-इन (केआई) के लिए। इस प्रोटोकॉल को CRISPR / Cas9 जीनोम संपादन का उपयोग करके ट्यून किया गया है, जिसके परिणामस्वरूप पारंपरिक समरूप पुनर्संयोजन-मध्यस्थता रैखिक डीएनए लक्ष्यीकरण विधि की तुलना में केआई दक्षता में काफी सुधार हुआ है।

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CRISPR/Cas9Gene TargetingEmbryonic Stem CellsGene-manipulated Mouse ModelsGene FunctionsIn VivoDrug SelectionMouse Embryonic FibroblastESCMEFElectroporationCas9 RNP DNA

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