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CRISPR/Cas9を介した胚性幹細胞における高効率遺伝子ターゲティングによる遺伝子操作マウスモデルの開発

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CRISPR/Cas9-Mediated Highly Efficient Gene Targeting in Embryonic Stem Cells for Developing Gene-Manipulated Mouse Models

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CRISPR/Cas9を介した胚性幹細胞における高効率遺伝子ターゲティングによる遺伝子操作マウスモデルの開発

DOI:

10.3791/64385-v

•

10:57 min

•

August 24, 2022

•

Manabu Ozawa*¹, Chihiro Emori*², Masahito Ikawa²

¹Laboratory of Reproductive Systems Biology, Center for Experimental Medicine and Systems Biology, The Institute of Medical Science,The University of Tokyo, ²Research Institute for Microbial Diseases,Osaka University

Chapters

00:04Introduction
01:06Gene Targeting of Embryonic Stem Cells (ESCs)
04:16PCR Genotyping of Targeted ESCs
07:02Preparation of Eight-Cell Stage Embryo and Microinjection of ESCs
09:49Results: Screening of Targeted ESC Clones
10:10Conclusion

Summary

Automatic Translation

ここでは、胚性幹細胞を用いた遺伝子改変マウスモデル、特に大型DNAノックイン(KI)の開発のためのプロトコルを紹介します。このプロトコルは、CRISPR/Cas9ゲノム編集を使用して調整されているため、従来の相同組換えを介した直鎖状DNAターゲティング法と比較して、KI効率が大幅に向上します。

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Keywords: CRISPR/Cas9 Gene Targeting Embryonic Stem Cells Gene-manipulated Mouse Models Gene Functions In Vivo Drug Selection Mouse Embryonic Fibroblast ESC MEF Electroporation Cas9 RNP DNA

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