Larvefilet forberedelse: En metode til at visualisere intakte sensoriske neuroner og tilhørende epidermale celler

Abstract

Kilde: Tenenbaum, C.M., Gavis, E. R. Fjernelse af Drosophila Muskelvæv fra Larval Fileter til immunfluorescens Analyse af sensoriske neuroner og epidermale celler. J. Vis. Exp. (2016).

Denne video beskriver, hvordan man forbereder larvefileter, der bruges til at visualisere sensoriske dendritiske arborization (da) neuroner og deres tilknyttede epidermale celler. Den fremhævede protokol viser i detaljer, hvordan man fjerner muskelvæv fra kropsvæggen og samtidig bevarer cellernes morfologi, hvilket forbedrer immunostaining og visualisering af de ellers tilslørede da neuroner og epidermale celler.

Protocol

Denne protokol er et uddrag fra Tenenbaum og Gavis, Fjernelse af Drosophila Muskelvæv fra Larval Fileter til immunfluorescensanalyse af sensoriske neuroner og epidermale celler, J. Vis. Exp. (2016). BEMÆRK: Proceduren for muskelfjernelse (figur 1) er en ændring af tidligere beskrevne metoder til tilberedning af larvefileter. De trin, der går forud for og følger muskelfjernelse, er skitseret kort, og læseren hen…

Representative Results

Figur 1: Oversigt over muskelfjernelsesprocedure. En larve dissekeres og fastgøres til en silikone elastomer dissekere parabol. For at fjerne muskelvæv indsættes en pincetprong mellem muskel- og epidermalcellelaget, startende fra den dorsale midterlinje nær en segmentgrænse (2.2). Tangen trækkes opad for at bryde fastgørelsen mellem musklen og kropsvæggen (2.3). Dette gentages for segmenter af interesse, og dereft…

Materials

Dumont #5 tweezers	Electron Microscopy Sciences	72701-D
Micro Scissors, 8 cm, straight, 5 mm blades, 0.1 mm tips	World Precision Instruments	14003
Sylgard 184 silicone elastomer kit	Dow Corning	3097358-1004	for dissecting plates
Austerlitz insect pins, 0.1 mm	Fine Science Tools	26002-10
Fostec 8375 light source	Artisan Technology Group	62792-4