Preparazione del raccordo larvale: un metodo per visualizzare i neuroni sensoriali intatti e le cellule epidermiche associate

Abstract

Fonte: Tenenbaum, C.M., Gavis, E. R. Rimozione del tessuto muscolare Drosophila dai filetti larvali per l’analisi dell’immunofluorescenza dei neuroni sensoriali e delle cellule epidermiche. J. Vis. Exp. (2016).

Questo video descrive come preparare filetti larvali utilizzati per visualizzare i neuroni di arborizzazione dendritica sensoriale (da) e le loro cellule epidermiche associate. Il protocollo in primo piano mostra in dettaglio come rimuovere il tessuto muscolare dalla parete corporea preservando la morfologia delle cellule, che migliora l’immunostaining e la visualizzazione dei neuroni da e delle cellule epidermiche altrimenti oscurati.

Protocol

Questo protocollo è un estratto da Tenenbaum e Gavis, Removal of Drosophila Muscle Tissue from Larval Fillets for Immunofluorescence Analysis of Sensory Neurons and Epidermal Cells, J. Vis. Exp. (2016). NOTA: La procedura per la rimozione muscolare(Figura 1) è una modifica dei metodi precedentemente descritti per la preparazione dei filetti larvali. I passaggi che precedono e seguono la rimozione muscolare sono del…

Representative Results

Figura 1: Panoramica della procedura di rimozione muscolare. Una larva viene sezionata e appuntata su un piatto di sezionatura di elastomero siliconico. Per rimuovere il tessuto muscolare, viene inserito un punto di forza tra lo strato muscolare e quello delle cellule epidermiche, a partire dalla linea mediana dorsale vicino a un limite di segmento (2.2). Le forcep vengono tirate verso l’alto per rompere l’attacco tra il …

Materials

Dumont #5 tweezers	Electron Microscopy Sciences	72701-D
Micro Scissors, 8 cm, straight, 5 mm blades, 0.1 mm tips	World Precision Instruments	14003
Sylgard 184 silicone elastomer kit	Dow Corning	3097358-1004	for dissecting plates
Austerlitz insect pins, 0.1 mm	Fine Science Tools	26002-10
Fostec 8375 light source	Artisan Technology Group	62792-4