Préparation des filets larvaires : une méthode pour visualiser les neurones sensoriels intacts et les cellules épidermiques associées

Abstract

Source : Tenenbaum, C.M., Gavis, E. R. Retrait du tissu musculaire de Drosophila des filets larvaires pour l’analyse d’immunofluorescence des neurones sensoriels et des cellules épidermiques. J. Vis. Exp. (2016).

Cette vidéo décrit comment préparer les filets larvaires utilisés pour visualiser les neurones sensoriels d’arborisation dendritique (da) et leurs cellules épidermiques associées. Le protocole présenté montre en détail comment enlever le tissu musculaire de la paroi du corps tout en préservant la morphologie des cellules, ce qui améliore l’immunostaining et la visualisation des neurones da autrement obscurcis et des cellules épidermiques.

Protocol

Ce protocole est un extrait de Tenenbaum et Gavis, Removal of Drosophila Muscle Tissue from Larval Fillets for Immunofluorescence Analysis of Sensory Neurons and Epidermal Cells, J. Vis. Exp. (2016). REMARQUE: La procédure d’ablation musculaire( figure 1) est une modification des méthodes précédemment décrites pour la préparation des filets larvaire. Les étapes qui précèdent et suivent l’ablation muscula…

Representative Results

Figure 1 : Vue d’ensemble de la procédure d’ablation musculaire. Une larve est disséquée et épinglée sur un plat disséquant de l’élastomer en silicone. Pour enlever le tissu musculaire, une pince de forceps est insérée entre le muscle et la couche épidermique de cellules, à partir de la ligne médiane dorsale près d’une limite de segment (2.2). Les forceps sont tirés vers le haut pour briser l’attac…

Materials

Dumont #5 tweezers	Electron Microscopy Sciences	72701-D
Micro Scissors, 8 cm, straight, 5 mm blades, 0.1 mm tips	World Precision Instruments	14003
Sylgard 184 silicone elastomer kit	Dow Corning	3097358-1004	for dissecting plates
Austerlitz insect pins, 0.1 mm	Fine Science Tools	26002-10
Fostec 8375 light source	Artisan Technology Group	62792-4