Larvale filetvoorbereiding: een methode om intacte sensorische neuronen en bijbehorende epidermale cellen te visualiseren

Abstract

Bron: Tenenbaum, C.M., Gavis, E.R. Verwijdering van Drosophila Spierweefsel uit Larvale Filets voor Immunofluorescentie Analyse van Sensorische Neuronen en Epidermale Cellen. J.Vis. Exp. (2016).

Deze video beschrijft hoe larvale filets te bereiden die worden gebruikt om sensorische dendritische arborization (da) neuronen en hun bijbehorende epidermale cellen te visualiseren. Het aanbevolen protocol laat in detail zien hoe spierweefsel uit de lichaamswand kan worden verwijderd met behoud van de morfologie van de cellen, wat de immunostaining en visualisatie van de anders verduisterde da-neuronen en epidermale cellen verbetert.

Protocol

Dit protocol is een fragment uit Tenenbaum en Gavis, Removal of Drosophila Muscle Tissue from Larval Fillets for Immunofluorescence Analysis of Sensory Neurons and Epidermal Cells, J. Vis. Exp. (2016). OPMERKING: De procedure voor spierverwijdering (figuur 1) is een wijziging van eerder beschreven methoden voor het bereiden van larvale filets. De stappen die voorafgaan aan en volgen op spierverwijdering worden kort g…

Representative Results

Figuur 1: Overzicht van spierverwijderingsprocedure. Een larve wordt ontleed en vastgemaakt aan een siliconen elastomeer ontleedschaal. Om spierweefsel te verwijderen, wordt één tangsteek tussen de spier- en epidermale cellaag ingebracht, beginnend bij de dorsale middellijn bij een segmentgrens (2.2). De tang wordt naar boven getrokken om de aanhechting tussen de spier en de lichaamswand te verbreken (2.3). Dit wordt he…

Materials

Dumont #5 tweezers	Electron Microscopy Sciences	72701-D
Micro Scissors, 8 cm, straight, 5 mm blades, 0.1 mm tips	World Precision Instruments	14003
Sylgard 184 silicone elastomer kit	Dow Corning	3097358-1004	for dissecting plates
Austerlitz insect pins, 0.1 mm	Fine Science Tools	26002-10
Fostec 8375 light source	Artisan Technology Group	62792-4