Preparação do filé larval: um método para visualizar neurônios sensoriais intactos e células epidérmicas associadas

Abstract

Fonte: Tenenbaum, C.M., Gavis, E. R. Remoção de Tecido Muscular Drosophila de Filés Larval para Análise de Imunofluorescência de Neurônios Sensoriais e Células Epidérmicas. J. Vis. Exp. (2016).

Este vídeo descreve como preparar filés larvais usados para visualizar neurônios de arborização dendrítica sensorial (da) e suas células epidérmicas associadas. O protocolo em destaque mostra em detalhes como remover tecido muscular da parede do corpo, preservando a morfologia das células, o que melhora a imunostaining e a visualização dos neurônios e células epidérmicas obscurecidas.

Protocol

Este protocolo é um trecho de Tenenbaum e Gavis, Remoção de Tecido Muscular Drosophila de Filés Larval para Análise de Imunofluorescência de Neurônios Sensoriais e Células Epidérmicas, J. Vis. Exp. (2016). NOTA: O procedimento de remoção muscular (Figura 1) é uma modificação dos métodos descritos anteriormente para o preparo de filés larvais. As etapas que precedem e seguem a remoção muscular são d…

Representative Results

Figura 1: Visão geral do procedimento de remoção muscular. Uma larva é dissecada e presa a um prato de dissecação de elastômero de silicone. Para remover o tecido muscular, um pino fórceps é inserido entre a camada muscular e epidérmica celular, começando a partir da linha dorsal média perto de um limite de segmento (2.2). Os fórceps são puxados para cima para quebrar o acessório entre o músculo e a parede…

Materials

Dumont #5 tweezers	Electron Microscopy Sciences	72701-D
Micro Scissors, 8 cm, straight, 5 mm blades, 0.1 mm tips	World Precision Instruments	14003
Sylgard 184 silicone elastomer kit	Dow Corning	3097358-1004	for dissecting plates
Austerlitz insect pins, 0.1 mm	Fine Science Tools	26002-10
Fostec 8375 light source	Artisan Technology Group	62792-4