Larval Fillet Preparation: Eine Methode zur Visualisierung intakter sensorischer Neuronen und assoziierter epidermaler Zellen

Abstract

Quelle: Tenenbaum, C.M., Gavis, E. R. Entfernung von Drosophila Muskelgewebe aus Larval Fillets für Immunfluoreszenzanalyse von sensorischen Neuronen und Epidermalzellen. J. Vis. (2016).

Dieses Video beschreibt, wie Larvenfilets vorbereitet werden, die verwendet werden, um sensorische dendritische Arborisation (da) Neuronen und die zugehörigen epidermalen Zellen zu visualisieren. Das vorgestellte Protokoll zeigt im Detail, wie Muskelgewebe aus der Körperwand entfernt wird, während die Morphologie der Zellen erhalten bleibt, was die Immunfärbung und Visualisierung der ansonsten verdeckten Da-Neuronen und epidermalen Zellen verbessert.

Protocol

Dieses Protokoll ist ein Auszug aus Tenenbaum und Gavis, Entfernung von Drosophila Muskelgewebe aus Larval Fillets für Immunfluoreszenzanalyse von sensorischen Neuronen und Epidermalzellen, J. Vis. Exp. (2016). HINWEIS: Das Verfahren zur Muskelentfernung (Abbildung 1) ist eine Modifikation der zuvor beschriebenen Methoden zur Herstellung von Larvenfilets. Die Schritte, die der Muskelentfernung vorausgehen und folgen…

Representative Results

Abbildung 1: Übersicht über die Muskelentfernung. Eine Larve wird seziert und an eine Silikon-Elastomer-Sezieren-Schale gepinnt. Um Muskelgewebe zu entfernen, wird eine Zange prong zwischen dem Muskel und epidermalen Zellschicht eingefügt, beginnend von der dorsalen Mittellinie in der Nähe einer Segmentgrenze (2.2). Die Zange wird nach oben gezogen, um die Befestigung zwischen Muskel und Körperwand zu brechen (2.3). …

Materials

Dumont #5 tweezers	Electron Microscopy Sciences	72701-D
Micro Scissors, 8 cm, straight, 5 mm blades, 0.1 mm tips	World Precision Instruments	14003
Sylgard 184 silicone elastomer kit	Dow Corning	3097358-1004	for dissecting plates
Austerlitz insect pins, 0.1 mm	Fine Science Tools	26002-10
Fostec 8375 light source	Artisan Technology Group	62792-4