Larval Filet Forberedelse: En metode for å visualisere intakte sensoriske nevroner og tilknyttede epidermale celler

Abstract

Kilde: Tenenbaum, C.M., Gavis, E. R. Fjerning av Drosophila Muskelvev fra Larval Fileter for immunfluorescens Analyse av sensoriske nevroner og epidermale celler. J. Vis. Utt. (2016).

Denne videoen beskriver hvordan du lager larvalfileter som brukes til å visualisere sensorisk dendritisk arborisering (da) nevroner og deres tilknyttede epidermale celler. Den omtalte protokollen viser i detalj hvordan du fjerner muskelvev fra kroppsveggen samtidig som cellenes morfologi bevares, noe som forbedrer immunoppnåelse og visualisering av de ellers skjulte da nevronene og epidermale cellene.

Protocol

Denne protokollen er et utdrag fra Tenenbaum og Gavis, Fjerning av Drosophila Muscle Tissue fra Larval Fileets for Immunofluorescence Analyse av sensoriske nevroner og epidermale celler, J. Vis. Exp. (2016). MERK: Prosedyren for muskelfjerning (figur 1) er en modifikasjon av tidligere beskrevne metoder for å forberede larvalfileter. Trinnene som går foran og følger muskelfjerning er skissert kort og leseren er ref…

Representative Results

Figur 1: Oversikt over muskelfjerningsprosedyren. En larve dissekeres og festes til en silikonelastomer dissekeringsfat. For å fjerne muskelvev settes det inn en tang mellom muskel- og epidermalt cellelag, fra den dorsale midtlinjen nær en segmentgrense (2,2). Tangene trekkes oppover for å bryte koblingen mellom muskelen og kroppsveggen (2.3). Dette gjentas for segmenter av interesse, og deretter er larven festet i for…

Materials

Dumont #5 tweezers	Electron Microscopy Sciences	72701-D
Micro Scissors, 8 cm, straight, 5 mm blades, 0.1 mm tips	World Precision Instruments	14003
Sylgard 184 silicone elastomer kit	Dow Corning	3097358-1004	for dissecting plates
Austerlitz insect pins, 0.1 mm	Fine Science Tools	26002-10
Fostec 8375 light source	Artisan Technology Group	62792-4