Larvfilépreparat: En metod för att visualisera intakta sensoriska nervceller och tillhörande epidermala celler

Abstract

Källa: Tenenbaum, C.M., Gavis, E. R. Avlägsnande av Drosophila muskelvävnad från larvfiléer för immunofluorescensanalys av sensoriska nervceller och epidermala celler. J. Vis. Exp. (2016).

Denna video beskriver hur man förbereder larvfiléer som används för att visualisera sensoriska dendritiska arborization (da) nervceller och deras associerade epidermal celler. Det presenterade protokollet visar i detalj hur man tar bort muskelvävnad från kroppsväggen samtidigt som cellernas morfologi bevaras, vilket förbättrar immunostaining och visualisering av de annars dolda da-nervcellerna och epidermala cellerna.

Protocol

Detta protokoll är ett utdrag från Tenenbaum och Gavis, avlägsnande av Drosophila muskelvävnad från larvfiléer för immunofluorescensanalys av sensoriska nervceller och epidermala celler, J. Vis. Exp. (2016). OBS: Förfarandet för muskelborttagning (figur 1) är en ändring av tidigare beskrivna metoder för att förbereda larvfiléer. Stegen som föregår och följer muskelborttagning beskrivs kortfattat och …

Representative Results

Figur 1: Översikt över muskelborttagningsproceduren. En larva dissekeras och fästs på en silikon elastomer dissekeringsfat. För att avlägsna muskelvävnad sätts en tång mellan muskel- och epidermalcellskiktet, med början från den dorsala mittlinjen nära en segmentgräns (2.2). Tången dras uppåt för att bryta fästet mellan muskeln och kroppsväggen (2.3). Detta upprepas för segment av intresse och sedan är…

Materials

Dumont #5 tweezers	Electron Microscopy Sciences	72701-D
Micro Scissors, 8 cm, straight, 5 mm blades, 0.1 mm tips	World Precision Instruments	14003
Sylgard 184 silicone elastomer kit	Dow Corning	3097358-1004	for dissecting plates
Austerlitz insect pins, 0.1 mm	Fine Science Tools	26002-10
Fostec 8375 light source	Artisan Technology Group	62792-4