Larval Lymph Drüsensektion: Isolierung des Drosophila Hämose-produzierenden Organs
Published: April 30, 2023
Abstract
Quelle: Reimels, T. A. und Pfleger, C.M. Methoden zur Untersuchung der Lymphdrüse und Hämozyten in Drosophila Larvae. J. Vis. (2016).
Dieses Video beschreibt die Drosophila-Lymphdrüse – die primäre Stelle der Hämatopoese in der Fliegenlarve – und zeigt ein Beispielprotokoll zur Sezieren und Montage des Organs für Immunhistochemie und fluoreszierende Bildgebung.
Protocol
Dieses Protokoll ist ein Auszug aus Reimels und Pfleger, Methods to Examine the Lymph Gland and Hemocytes in Drosophila Larvae, J. Vis. Exp. (2016). 1. Larval Lymph Drüsen-Immunhistochemie HINWEIS: Die Lymphdrüse befindet sich etwa ein Drittel Länge vom vorderen Ende einer Larve etwas unterhalb des Gehirns auf der Rückenseite. (Siehe Pfeil in Abbildung 1B.) Die Lymphdrü…
Representative Results
Abbildung 1: In Vivo Kristallzellmelanisierung. A) Larven wurden vor dem Erhitzen einzeln in PCR-Röhren platziert. Rote Pfeile zeigen Larven an, die sich nicht am unteren Rand der Rohre befinden. B) Ein typisches Kristallzell-Melanisationsmuster nach dem Erhitzen, das manchmal die Lymphdrüse offenbart (Pfeil; dorsale Seite gezeigt, vorderes ist links). Maßstabsleiste steht fü…
Materials
| PBS tablets | MP Biomedicals | 2810305 | |
| dissecting dish | Corning | 7220-85 | |
| microcentrifuge tube | Denville | C2170 | |
| silicone dissecting pad, made from Sylgard 184 kit | Krayden (distributed through Fisher) | NC9644388 (Fisher catalog number) | Made in petri dish by mixing components of Sylgard elastomer kit according to manufacturer instructions. |
| stereomicroscope | Morrell Instruments (Nikon distributor) | mna42000, mma36300 | Nikon models SMZ1000 and SMZ645 |
| tissue wipe | VWR | 82003-820 | |
| forceps | Electron Microscopy Sciences | 72700-DZ | |
| p200 pipette | Eppendorf | 3120000054 | |
| formaldehyde | Fisher | BP531-500 | |
| Triton | Fisher | BP151-500 | |
| Tween 20 | Fisher | BP337-500 | |
| bovine serum albumin | Rocky Mountain Biologicals | BSA-BSH-01K | |
| normal goat serum | Sigma | G9023-10ML | |
| normal donkey serum | Sigma | D9663-10ML | |
| 200 proof ethanol | VWR | V1001 | |
| N-propyl gallate | MP Biomedicals | 102747 | |
| glycerol | VWR | EM-4750 | |
| DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole) | Fisher | 62248 | |
| microscope cover glass, 18 mm circular | Fisher | 12-545-100 | |
| glass microscope slides | Fisher | 22-034-980 | |
| 24-well plate | Corning | 351147 | |
| disposable transfer pipet | Fisher | 13-711-9AM | |
| fluorescence microscope | Zeiss | Axio Imager.Z1 |
Cite This Article
Larval Lymph Gland Dissection: Isolating the Drosophila Hemocyte-Producing Organ. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20117, doi: (2023).